細(xì)胞空泡原因及解決方法有哪些

培養(yǎng)細(xì)胞過(guò)程中，可能會(huì)遇到細(xì)胞空泡化現(xiàn)象，具體表現(xiàn)為：變性細(xì)胞的胞質(zhì)、胞核內(nèi)出現(xiàn)大小不一的空泡(水泡)，細(xì)胞呈蜂窩狀或網(wǎng)狀的現(xiàn)象。變性嚴(yán)重者，小水泡相互融合成大水泡，細(xì)胞核懸于中央，或被擠于一側(cè)，細(xì)胞形體顯著腫大，胞質(zhì)空白，外形如氣球狀。

那么細(xì)胞空泡原因及解決方法有哪些?

1.細(xì)胞老化

這是因?yàn)樵囵B(yǎng)時(shí)細(xì)胞處于終末分化狀態(tài)，不會(huì)再分裂，如果培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)細(xì)胞就會(huì)空泡化從而導(dǎo)致死亡。但傳代細(xì)胞出現(xiàn)這種狀況比較少見(jiàn)，如果出現(xiàn)，原因一般都是因?yàn)榧?xì)胞傳代次數(shù)過(guò)多，嚴(yán)重老化。

解決方法

原代細(xì)胞使用較低代次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，傳代細(xì)胞避免傳代次數(shù)過(guò)高。

2.培養(yǎng)液錯(cuò)誤配制

培養(yǎng)液配制錯(cuò)誤、過(guò)期儲(chǔ)存、儲(chǔ)存不當(dāng)、血清質(zhì)量不合格等原因，引起培養(yǎng)液的滲透壓與PH值發(fā)生改變。

解決方法

更換新鮮培養(yǎng)液調(diào)整到合適的PH值，再進(jìn)行培養(yǎng)。

注意培養(yǎng)液的正確配制與存儲(chǔ)方法。

使用質(zhì)量好和渠道正規(guī)的胎牛血清，因?yàn)檫@樣的血清營(yíng)養(yǎng)豐富且外源刺激因子少，可以有效的避免出現(xiàn)這類問(wèn)題。

3.細(xì)胞消化時(shí)操作不當(dāng)

胰酶消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)受損，以及吹打時(shí)力氣過(guò)大產(chǎn)生的大量氣泡長(zhǎng)期存在于培養(yǎng)液中也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的空泡化。

解決方法

選用合適的胰酶濃度和適當(dāng)?shù)南瘯r(shí)間進(jìn)行消化。

在操作時(shí)避免吹打太過(guò)用力出現(xiàn)太多氣泡，如果出現(xiàn)了大量氣泡，可將氣泡去除后再培養(yǎng)。

4.及時(shí)更換培養(yǎng)基

細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)會(huì)進(jìn)行代謝，如果不及時(shí)換液細(xì)胞會(huì)因?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不斷消耗、細(xì)胞代謝產(chǎn)物的積累從而使細(xì)胞缺乏營(yíng)養(yǎng)，導(dǎo)致饑餓誘導(dǎo)形成自噬，從而產(chǎn)生空泡化，這種空泡在光學(xué)顯微鏡下是看不到的，只有在電鏡下才能觀察到。

解決方法

及時(shí)換液，通常2-3天需換液。

5.污染

化學(xué)物質(zhì)：培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)引入了一些各種自然或人工化合物等化學(xué)物質(zhì)，如弱堿胺類物質(zhì)導(dǎo)致的溶酶體的空泡化；MIPP， 一種查爾酮相關(guān)的分子，可以誘導(dǎo)大量的胞質(zhì)空泡，導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)相關(guān)巨泡式死亡的特征。

細(xì)菌、病毒：細(xì)菌和病毒的產(chǎn)物或者細(xì)菌病毒感染細(xì)胞后導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差也會(huì)引起細(xì)胞空泡化，而其機(jī)制也各不相同。

解決方法

在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)提高無(wú)菌操作意識(shí)，操作規(guī)范，使用無(wú)菌試劑、耗材。

可定時(shí)通過(guò)PCR或市面上專用的檢測(cè)試劑盒來(lái)鑒定是否發(fā)生了污染，一旦發(fā)現(xiàn)立即做出處理，避免污染其他細(xì)胞。

在生物細(xì)胞學(xué)研究中，有時(shí)需要體外培養(yǎng)和分析癌細(xì)胞。細(xì)胞要養(yǎng)好，就要用好血清!

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