透析胎牛血清工藝及用途

　　細(xì)胞培養(yǎng)基作為細(xì)胞培養(yǎng)基的組成成分，胎牛血清為細(xì)胞生長(zhǎng)提供激素、生長(zhǎng)因子、結(jié)合蛋白、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、黏附因子等物質(zhì)，促進(jìn)體外細(xì)胞培養(yǎng)。

　　但在某些研究中，需要避免胎牛血清中一些小分子物質(zhì)的影響，就需要用到特殊處理的血清——透析胎牛血清。

　　今天從生產(chǎn)工藝以及應(yīng)用角度，對(duì)透析胎牛血清進(jìn)行介紹，幫助大家了解Ausbian透析胎牛血清有哪些特點(diǎn)。

　　一、透析胎牛血清的生產(chǎn)工藝

　　1、透析胎牛血清是在胎牛血清的基礎(chǔ)上進(jìn)行加工的。

　　胎牛血清在無(wú)菌條件下要經(jīng)過(guò)多重過(guò)濾，進(jìn)行一系列的檢測(cè)：

　　理化性質(zhì)檢查（如滲透壓和pH值）

　　成分檢查（如內(nèi)毒素和血紅蛋白）

　　外源因子檢查（如細(xì)菌、病毒和支原體）

　　促進(jìn)細(xì)胞增殖的檢查等

　　透析胎牛血清為保證其性能和安全性，也需具備胎牛血清的這些工藝和檢查。

　　2、透析胎牛血清，需經(jīng)過(guò)透析處理。

　　在4°C下用特定的透析膜對(duì)血清在0.15M NaCl中透析。由于該透析膜只允許10 kDa以下的小分子穿過(guò)，在滲透壓的作用下，這些小分子便從血清中滲析到透析膜外的NaCl溶液中。10 kDa以下的小分子有化學(xué)小分子、核苷酸、某些激素、鹽、低分子量蛋白質(zhì)、氨基酸、細(xì)胞因子、葡萄糖、殘留抗生素和其他外源分子。

　　那么透析的效果如何？以及透析到何時(shí)呢？

　　由于不可能監(jiān)測(cè)全部小分子，因此常選用葡萄糖為代表。血清中葡萄糖<5 mg/dL，即可以停止透析了。透析過(guò)程中，除監(jiān)測(cè)葡萄糖濃度外（可采用葡萄糖氧化酶方法測(cè)定），還需仔細(xì)監(jiān)測(cè)pH值和滲透壓。

　　3、該透析一般采用切向流過(guò)濾（tangential flow filtration）。

　　也就是液體流動(dòng)方向與過(guò)濾方向呈垂直方向的過(guò)濾形式。該方式使液體流動(dòng)在濾膜表面產(chǎn)生剪切力，減小了濾膜上的物質(zhì)堆積，保證了穩(wěn)定的過(guò)濾速度。

　　透析胎牛血清

　　二、 透析胎牛血清的應(yīng)用

　　透析胎牛血清主要用于可能需要關(guān)注小分子濃度的特殊研究。這主要包括四個(gè)領(lǐng)域，其中有些領(lǐng)域是相互交叉的，透析胎牛血清應(yīng)用廣泛，以下僅稍作舉例。

　　蛋白質(zhì)組學(xué)

　　同位素標(biāo)記

　　細(xì)胞通訊

　　報(bào)告基因細(xì)胞系的篩選

　　1、 細(xì)胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)（簡(jiǎn)稱(chēng)SILAC）。

　　這是一項(xiàng)以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，全稱(chēng)為Stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC)。它將13C或15N標(biāo)記的氨基酸摻入到培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞，來(lái)標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)新合成的蛋白質(zhì)，一般培養(yǎng)5-6代，細(xì)胞中的蛋白質(zhì)將都被同位素標(biāo)記。然后質(zhì)譜分析，即可比較經(jīng)過(guò)不同處理的細(xì)胞，其內(nèi)部蛋白質(zhì)豐度的變化。它還可用于正常細(xì)胞與病理狀態(tài)細(xì)胞二者的比較。為避免胎牛血清中天然氨基酸的干擾，這時(shí)就需要用到透析胎牛血清，以保證摻入細(xì)胞蛋白中的氨基酸均為標(biāo)記氨基酸（常采用賴(lài)氨酸或精氨酸）。

　　2、工程細(xì)胞株的篩選。

　　以常見(jiàn)的工程細(xì)胞株CHO-DFGRˉ為例，該細(xì)胞自身缺乏二氫葉酸還原酶（DHFR），必須在添加了次黃嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸的培養(yǎng)液中才能得以存活。如將含有目的基因與DHFR基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，則可以得到在不含上述添加劑的培養(yǎng)基上也能生長(zhǎng)的細(xì)胞克隆。通過(guò)甲氨蝶呤（MTX）進(jìn)一步篩選，可進(jìn)一步得到能表達(dá)大量目的蛋白的細(xì)胞克隆。這時(shí)的胎牛血清由于不含有次黃嘌呤和胸腺嘧啶等，也常作為選擇培養(yǎng)基的一部分，參與陽(yáng)性轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆的篩選。

　　3、研究某些因子如核苷酸或微量元素如硒、鋅對(duì)某種類(lèi)型細(xì)胞增殖、分化的影響。

　　這時(shí)也需要用透析胎牛血清，以避免培養(yǎng)體系中天然存在的這些物質(zhì)的干擾。

　　透析胎牛血清

　　三、Ausbian透析胎牛血清

　　作為一款備受實(shí)驗(yàn)人員青睞的血清，Ausbian透析胎牛血清有以下優(yōu)點(diǎn)：

　　1、內(nèi)毒素更低，細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程更健康。

　　2、每批都有提供詳盡的檢測(cè)報(bào)告，各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)完整，清晰，實(shí)驗(yàn)人員一目了然。

　　3、從出廠到實(shí)驗(yàn)室，全程冷鏈運(yùn)輸，不出現(xiàn)凍融現(xiàn)象，血清質(zhì)量能保證。

　　4、有100ml和500ml大小兩種包裝，實(shí)驗(yàn)人員選擇更方便。

　　5、原裝進(jìn)口的Ausbian?透析胎牛血清，到達(dá)國(guó)內(nèi)后現(xiàn)貨才開(kāi)始銷(xiāo)售，實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有國(guó)際貨運(yùn)風(fēng)險(xiǎn)。

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