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干貨分享：細胞轉染全攻略（上）

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發表時間：2022-11-09 20:02

　　定義：細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。

　　分類：

　　按轉染途徑可分為：細胞轉染分為物理介導、化學介導和生物介導三類。

　　按轉染結果可分為：瞬時轉染和穩定轉染

　　應用：在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中。

　　總結：轉染，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。

　　1、不同轉染途徑的比較

　　1）.物理介導：電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例。

　　2）.化學介導：方法很多，如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術。

　　3）.生物介導：方法有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。

　　理論上，最理想的細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。病毒介導的轉染技術，目前看來，雖然轉染效率最高、細胞毒性低，但整個過程比較復雜復雜，常常對細胞類型有很強的選擇性。

　　因此，無論采用哪種轉染技術，想要獲得**的轉染結果，都需要對轉染條件進行一定的優化。

　　影響轉染效率的因素很多，從細胞類型、細胞培養條件和細胞生長狀態，到轉染方法的操作細節，都需要考慮。

　　三種轉染方法的優劣都給大家準備好了，有需要的同學可以截圖保存。

　　2、不同轉染結果的比較

　　瞬時轉染（transient transfection）

　　外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數，產生高水平表達，但通常只持續幾天，多用于啟動子和其他調控元件的分析。一般來說，超螺旋質粒DNA轉染效率較高，在轉染后24~72h小時內（依賴于各種不同的構建）分析結果，常常用到一些報告系統和熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測。

　　穩定轉染（Stable transfected）

　　外源DNA既可以整合到宿主細胞中，也可能作為一種游離體（episome）存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉染細胞能整合，通常需要通過一些選擇性標記。如來氨丙基轉移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素磷酸轉移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反復篩選，得到穩定轉染的同源細胞系。

　　血清在細胞培養過程中的重要性不言而喻：

　　提供對維持細胞指數生長的激素，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。

　　提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調節它們所結合的物質活力。

　　有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用。

　　是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。

　　起酸堿度緩沖液作用。

　　提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。

　　參與細胞凍存。

　　一款優質的血清，絕對能成為細胞實驗的“最強輔助”。

　　Ausbian進口特級胎牛血清與市面上其他品牌血清相比，有獨特優勢：

　　1. 精選內毒素更低批次（≤3EU/ml），原裝進口。是細胞典藏等重大項目十幾年的穩定供應品牌。

　　2. 新批次在試用前，提供試用服務，養細胞更放心。