常規(guī)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)大匯總（一）

　　在很多課題中，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)都是不可或缺的。除了之前我們介紹的細(xì)胞復(fù)蘇、傳代和凍存這“基礎(chǔ)三件套”之外，還有許多常見(jiàn)的操作，需要我們了解甚至是熟練掌握。

　　今天我們就來(lái)盤(pán)點(diǎn)一下，那些助力高分文章發(fā)表的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)技術(shù)（**期）。

　　細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

　　MTT法：又稱MTT比色法，是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。

　　檢測(cè)原理：

　　活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。

　　用途：廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測(cè)定等。

　　特點(diǎn)：靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。

　　CCK-8法：又稱細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)。

　　檢測(cè)原理：

　　該試劑中含有WST-8，在電子載體1-Methoxy PMS的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan dye）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。

　　用途：廣泛用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏試驗(yàn)等。

　　特點(diǎn)：對(duì)細(xì)胞毒性小，可以多次測(cè)定選取**測(cè)定時(shí)間；檢測(cè)迅速；靈敏度高

　　BrdU法：直接測(cè)定進(jìn)行分裂的細(xì)胞數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖能力。

　　檢測(cè)原理：

　　用BrdU預(yù)處理的細(xì)胞中，BrdU可代替胸腺嘧啶核苷插入復(fù)制的DNA雙鏈中，而且這種置換可以穩(wěn)定存在，并帶到子代細(xì)胞中。細(xì)胞經(jīng)過(guò)固定和變性處理后，可用免疫學(xué)方法檢測(cè)DNA中BrdU的含量(如采用鼠抗BrdU單克隆抗體特異識(shí)別BrdU,再采用辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的山羊抗鼠IgG二抗標(biāo)記，最后用比色法或熒光的方法進(jìn)行定量測(cè)定)，從而判斷細(xì)胞的增殖能力。

　　用途：可判斷增殖細(xì)胞的種類，增殖速度，對(duì)研究細(xì)胞動(dòng)力學(xué)有重要意義。

　　特點(diǎn)：簡(jiǎn)單、快速、安全，檢測(cè)的敏感性好；適合于大塊組織的快速檢查，尤適于定量研究；BrdU既可用于活體標(biāo)記，亦可用于細(xì)胞或組織細(xì)胞增殖、分化的標(biāo)記。副作用低；此方法的缺點(diǎn)是標(biāo)記時(shí)間較短。

　　EDU法：檢測(cè)細(xì)胞增殖的方法。

　　檢測(cè)原理：

　　EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替T滲入正在復(fù)制的DNA分子，通過(guò)基于EdU與熒光染料的特異性反應(yīng)檢測(cè)DNA復(fù)制活性，通過(guò)檢測(cè)EdU標(biāo)記便能準(zhǔn)確地反映細(xì)胞的增殖情況。與BrdU檢測(cè)方法相比，EdU檢測(cè)方法更快速、更靈敏、更準(zhǔn)確。EdU檢測(cè)染料只有BrdU抗體大小的1/500，在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散，無(wú)需DNA變性（酸解、熱解、酶解等）即可有效檢測(cè)，可有效避免樣品損傷，在細(xì)胞和組織水平能更準(zhǔn)確地反映細(xì)胞增殖等現(xiàn)象。

　　用途：在細(xì)胞水平上EdU對(duì)增殖細(xì)胞的標(biāo)記，對(duì)植物增殖細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記并檢測(cè)、細(xì)胞示蹤實(shí)驗(yàn)等。

　　特點(diǎn)：EdU法檢測(cè)細(xì)胞增殖，無(wú)需抗體，無(wú)變性步驟，保持細(xì)胞形態(tài)和DNA完整性。

　　細(xì)胞凋亡

　　磷脂酰絲氨酸外翻分析：又叫做Annexin V法，常用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。

　　檢測(cè)原理：

　　磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在細(xì)胞凋亡的早期，PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力特異性結(jié)合。將Annexin-V進(jìn)行熒光素(FITC、PE)或biotin標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin-V作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。

　　碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一種核酸染料，它不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI能夠透過(guò)細(xì)胞膜而使細(xì)胞核紅染。因此將Annexin-V與PI匹配使用，就可以將凋亡早晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。

　　用途：用于區(qū)分早期凋亡的細(xì)胞與晚期凋亡加壞死的細(xì)胞。最適合懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞。

　　特點(diǎn)：某些細(xì)胞的細(xì)胞膜外表面帶有大量的PS，因而也不能使用該方法(比如巨核細(xì)胞、血小板、某些骨髓系細(xì)胞)；靈敏度高、方便快捷；只適用于活細(xì)胞，不能用能破壞細(xì)胞膜完整性的固定劑和穿透劑固定或穿膜。

　　作為細(xì)胞生長(zhǎng)的媒介之一，血清品質(zhì)優(yōu)劣，直接影響細(xì)胞的長(zhǎng)勢(shì)，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的產(chǎn)出。

　　因此，挑選一款品質(zhì)優(yōu)異的血清尤為重要。Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清，采自5-8個(gè)月胎齡牛胚胎中的胎血，出廠前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)控，并附詳細(xì)《檢測(cè)報(bào)告》，如pH值、滲透壓、內(nèi)毒素、病毒檢測(cè)、促細(xì)胞生長(zhǎng)能力、無(wú)菌等檢查，均有詳細(xì)說(shuō)明。

　　Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清與市面上其他品牌血清相比，有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)：

　　1. 精選內(nèi)毒素更低批次（≤3EU/ml），原裝進(jìn)口。是細(xì)胞典藏等重大項(xiàng)目十幾年的穩(wěn)定供應(yīng)品牌。

　　2. 新批次在試用前，提供試用服務(wù)，養(yǎng)細(xì)胞更放心。

　　3. 每個(gè)批次產(chǎn)量800-2000升，試用滿意的實(shí)驗(yàn)室批號(hào)優(yōu)先鎖定，保證大多數(shù)項(xiàng)目?jī)赡瓴恍钃Q批次，細(xì)胞試驗(yàn)數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

　　4. 每年按廠家生產(chǎn)順序，會(huì)有多批次平行供應(yīng)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室專屬批號(hào)管理，保證供貨穩(wěn)定。

　　5. 為Ausbian血清用戶免費(fèi)提供申報(bào)支持，具有完整的檢測(cè)報(bào)告，為各類項(xiàng)目的申報(bào)提供支持（同時(shí)為血清VIP用戶在支原體檢測(cè)、方法學(xué)驗(yàn)證等方面，提供更多免費(fèi)延伸性技術(shù)幫助）。

　　6. 針對(duì)特殊科研項(xiàng)目，可提供3-5個(gè)平行批次，讓試驗(yàn)人有更多選擇空間。

　　7. 為Ausbian血清提供免費(fèi)代儲(chǔ)存服務(wù)，為儲(chǔ)存空間不足的實(shí)驗(yàn)室提供可靠的血清倉(cāng)儲(chǔ)保護(hù)，按要求隨時(shí)發(fā)貨。

　　8. Ausbian血清從出廠，到實(shí)驗(yàn)室，全程低溫冷鏈保護(hù)，確保血清無(wú)反復(fù)凍融。

　　9. 免費(fèi)真品保障，每個(gè)血清瓶身加貼Viansaga?易破損防偽標(biāo)簽，Ausbian品牌真品保護(hù)，逢假必究，為實(shí)驗(yàn)室做好售后保障。

　　10. 免費(fèi)無(wú)憂售后，所有實(shí)驗(yàn)室簽收的Ausbian胎牛血清，從簽收日開(kāi)始計(jì)算，一年之內(nèi)，血清在妥善保管、未開(kāi)封未融化、且不影響二次銷售的情況下，均可享受無(wú)條件退貨或換貨的售后保障。

　　11. 免費(fèi)專業(yè)幫助，匯集近二十年，千萬(wàn)個(gè)血清用戶細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，為各種細(xì)胞培養(yǎng)提供問(wèn)題梳理分析，解決方案參考。

　　12. Ausbian品牌擁有全系列血清產(chǎn)品線：

　　特級(jí)胎牛血清、細(xì)胞治療專用胎牛血清（貨號(hào)：WS500T(紅點(diǎn))），透析胎牛血清 （貨號(hào)：VS500TZ）等多系列產(chǎn)品，服務(wù)更專業(yè)更精準(zhǔn)。

　　如果你對(duì)本公司產(chǎn)品感興趣，想要了解更多，歡迎致電咨詢熱線：400-166-8600

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