LAMP檢測技術與qPCR檢測技術的區別與不足

LAMP檢測 與 qPCR檢測的區別與不足

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發表時間:2023-08-10 10:54

前幾篇文章我們分享了核酸檢測方法中LAMP檢測技術qPCR檢測技術,那二者有何區別呢?今天小編就詳細說說LAMP檢測與qPCR檢測有何區別和不足。

擴增原理:

LAMP:等溫擴增技術,且引物設計與擴增動力學都很復雜。

qPCR:在不同溫度下進行的循環性核酸擴增技術,通過熒光信號監測擴增產物的積累,實現定量分析。

溫度條件:

LAMP:一個恒定的等溫環境(通常在60-65°C),對設備要求較低。

qPCR:qPCR需要多個溫度循環,包括變性、退火和延伸階段,需要精確的溫控設備。

引物設計:

LAMP:使用多個引物,包括外部引物、內部引物和環引物。這些引物的設計相對復雜,要求特定的序列和結構。

qPCR:使用少量的引物(通常一對引物),引物設計相對簡單,需要特異性和合適的引物序列。

實時監測:

LAMP:產物通常通過肉眼可見的方式來判斷,也可以使用熒光染料等進行增強。

qPCR:利用熒光探針或SYBR Green等熒光信號實時監測擴增產物的積累,可以定量分析。

LAMP與qPCR相比有哪些不足?

由于LAMP方法與qPCR方法各自的特點,導致這兩種檢測手段分別有其不同的適用范圍。

  1. 產物結構復雜:LAMP擴增產物呈現出高度分支的簇環結構,這種結構可能對產物的純化和后續分析造成一些挑戰

  2. 不適用于大片段擴增:LAMP技術相對適用于短片段的核酸擴增,不太適用于較長片段的擴增,這一點與傳統PCR方法不同。

  3. 定量困難:LAMP技術的產物數量與起始模板數量之間的線性關系可能較差,因此在定量方面存在一定的局限性。

  4. 部分產物難以區分:LAMP反應產物包括多個簇環結構,其中有些結構可能與非特異性產物難以區分,可能對結果解釋帶來困擾。

LAMP:適用于快速、初步的檢測,如一些疾病的早期篩查,野外環境中的檢測等。

如:臨床中的一些疾病檢測試劑盒。

qPCR:在精確定量和定性檢測方面表現出色,廣泛用于病原體檢測、基因表達分析等。

如:支原體qPCR檢測試劑盒

德國MB支原體qPCR檢測試劑盒

①經典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性,一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體),根據序列一致性,至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單,易于觀察(使用MB的試劑盒,下表中列出的支原體物種均為陽性,其他微生物或真核細胞均為陰性,無交叉反應)。


支原體qPCR檢測試劑盒


支原體qPCR檢測試劑盒檢測物種

③高靈敏度,MB公司的支原體qPCR檢測試劑盒經典法最低檢測限可達到≤10CFU/ml。

支原體qPCR檢測試劑盒檢測物種

MB公司的支原體qPCR檢測試劑盒一步法最低檢測限≥50個基因組/反應。

④MB公司有相應配套的10CFU/100CFU的敏感度測試的標準品,便于方法學驗證。

⑤MB公司有相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA,便于特異性驗證。

⑥MB公司有相應配套的支原體絕對定量標準品,便于最后定量檢測。

支原體qPCR檢測試劑盒特點

1.內控對照為獨立包裝,遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2.高特異性,一次檢測即可涵蓋所有常見易感染細胞的支原體物種(包括歐洲藥典規定的9種支原體)。與細菌和真核DNA無交叉反應。

3.高靈敏度,最低檢測限可達到≤10CFU/ml。

4.相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA,便于特異性驗證。

5.有相應配套的支原體絕對定量標準品,便于最后定量檢測。

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