原代細胞培養(yǎng)技巧,胎牛血清的選擇很重要

原代細胞培養(yǎng)胎牛血清的選擇很重要

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發(fā)表時間:2023-08-14 14:08

細胞培養(yǎng)是生物學和醫(yī)學研究最常用的手段之一,可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)兩種。原代培養(yǎng)是直接從生物體獲取組織或器官的一部分進行培養(yǎng),也稱初代培養(yǎng)。嚴格地說即從體內取出組織接種培養(yǎng)到**次傳代階段,但實際上,通常把**代至第十代以內的培養(yǎng)細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。一般持續(xù)1-4周。此期細胞呈活躍的移動,可見細胞分裂,但不旺盛。

原代細胞可以懸浮培養(yǎng)或貼壁培養(yǎng)。一些細胞自然地懸浮在懸浮液中,而不附著在表面上(例如,來源于外周血的細胞)。也有一些細胞系經過修飾可以在懸浮培養(yǎng)中存活,它們的生長密度高于粘附條件所允許的密度。對于依賴貼壁的原代細胞,貼壁細胞(例如實體組織)需要一個表面才能在體外正常生長。

這些細胞大多在沒有涂層的扁平塑料容器中培養(yǎng),但有時在微載體上培養(yǎng),可以用細胞外基質蛋白(如膠原蛋白和層粘連蛋白)包被,以增加粘附特性并提供生長和分化所需的其他信號。細胞培養(yǎng)基由補充了適當的生長因子和細胞因子的基礎培養(yǎng)基組成,細胞在細胞培養(yǎng)箱中生長,并維持在適當的溫度和混合氣體中(對于哺乳動物細胞,通常為37°C,5CO2)。培養(yǎng)條件根據細胞類型而廣泛變化,生長培養(yǎng)基的pH、葡萄糖濃度、生長因子和其他營養(yǎng)物質的存在可能會有所不同,具體取決于細胞類型。

在建立原代培養(yǎng)過程中,必須在生長培養(yǎng)基中加入抗生素以抑制從宿主組織引入的污染。抗生素可能包括慶大霉素,青霉素,鏈霉素和兩性霉素B的混合物。但是,不建議長期使用抗生素,因為某些試劑(例如兩性霉素B)從長期來看可能對細胞有毒。

分離后保留原代細胞的活力非常重要,因為它們中的大多數會經歷衰老過程,并在一定數量的種群倍增后停止分裂。為了使細胞長期存活,必須具備出色的細胞培養(yǎng)操作技能以及適當的培養(yǎng)條件(即生長培養(yǎng)基、溫度、氣體混合物、pH、生長因子濃度、營養(yǎng)物質和葡萄糖等)。用于補充培養(yǎng)基的生長因子通常來自動物血液(血液來源的成分具有污染的可能性),建議盡可能減少或消除這些成分的使用,操作時也需要使用無菌技術。

在生物細胞學研究中,有時需要體外培養(yǎng)和分析癌細胞。細胞要養(yǎng)好,就要用好血清

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