數(shù)字PCR的原理及操作步驟

數(shù)字PCR檢測(cè)技術(shù)不同于其他PCR檢測(cè)技術(shù)，是一種高度靈敏和準(zhǔn)確的核酸檢測(cè)技術(shù)，數(shù)字聚合酶鏈反應(yīng)（Digital PCR，dPCR）的基本原理是將樣本中的目標(biāo)分子均勻地分割成許多微小反應(yīng)單元，并在每個(gè)反應(yīng)單元中進(jìn)行PCR擴(kuò)增。通過(guò)對(duì)反應(yīng)單元的陽(yáng)性和陰性結(jié)果進(jìn)行數(shù)字計(jì)數(shù)，可以確定目標(biāo)分子的存在與否，從而實(shí)現(xiàn)精確定量。

dPCR的步驟

樣本準(zhǔn)備：首先，從樣本中提取目標(biāo)DNA或RNA，并根據(jù)需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)念A(yù)處理，例如逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)或DNA純化等。

樣本分割：將樣本分割成大量微小反應(yīng)單元，可以使用微滴數(shù)字PCR芯片、微流控芯片或數(shù)字PCR芯片等分割技術(shù)。每個(gè)反應(yīng)單元包含零個(gè)或一個(gè)目標(biāo)分子。

PCR擴(kuò)增：在每個(gè)微小反應(yīng)單元中進(jìn)行PCR擴(kuò)增。由于每個(gè)反應(yīng)單元中僅包含少量目標(biāo)分子，使得擴(kuò)增達(dá)到飽和狀態(tài)的概率較小，從而減少了PCR擴(kuò)增效率對(duì)結(jié)果的影響。

結(jié)果測(cè)定：通常使用熒光探針、探針?biāo)饣驘晒馊玖系确椒▽?duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)產(chǎn)物是否達(dá)到熒光檢測(cè)閾值，可以判定每個(gè)反應(yīng)單元是陽(yáng)性還是陰性。

數(shù)據(jù)分析：將陽(yáng)性和陰性結(jié)果的數(shù)字計(jì)數(shù)與總反應(yīng)單元數(shù)量相比較，即可得到目標(biāo)分子的絕對(duì)拷貝數(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分子的精確定量。

北京締一生物科技有限公司國(guó)內(nèi)總代Ausbian品牌,德國(guó)Minerva-Biolabs微生物污染控制系列。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)使用的Ausbian澳洲進(jìn)口特級(jí)胎牛血清,新生牛血清，干細(xì)胞培養(yǎng)基,馬血清，德國(guó)MB支原體檢測(cè)/祛除試劑盒,DNA污染祛除試劑,支原體PCR/qPCR定量試盒等產(chǎn)品。歡迎訪問締一生物官網(wǎng)：www.276mk.com。聯(lián)系電話:4006661688.