細胞污染類型及解決辦法

本文匯總了細胞污染的主要類型及解決辦法

一、細胞污染的分類

1、細菌污染

①細胞培養(yǎng)基在短時間內(nèi)迅速渾濁；

②靜置的培養(yǎng)液時不渾濁，但稍加震蕩，就有許多渾濁物漂起；

③顯微鏡下可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒物漂浮；

④細胞停止生長、出現(xiàn)大量死亡；

當(dāng)細胞出現(xiàn)上述癥狀時，基本可以斷定，細胞發(fā)生了細菌污染。

2、支原體污染

①生長速率緩慢、活力下降、易脫壁；

②細胞形態(tài)改變；

③細胞易聚團；

④在顯微鏡下，可見培養(yǎng)液中產(chǎn)生大量碎片（培養(yǎng)基不渾濁）；

⑤在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液很快變黃（意味著培養(yǎng)液中有看不見的大量微生物繁殖，營養(yǎng)被消耗）；

由于支原體體型微小，在細胞培養(yǎng)過程中，普通光學(xué)顯微鏡很難觀察到，只有在電鏡下才能拍到支原體的照片。細胞培養(yǎng)過程中的支原體污染，會大量消耗培養(yǎng)液中的營養(yǎng)。98%會附著在細胞表面，導(dǎo)致細胞生長狀態(tài)發(fā)生異常，甚至引起死亡，最終導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)發(fā)生異常。

當(dāng)細胞出現(xiàn)上述癥狀時，基本可以斷定，細胞發(fā)生了支原體污染。

3、真菌污染

①在細胞培養(yǎng)液中會形成淡黃色或白色的漂浮物，肉眼可見，但培養(yǎng)液在短期內(nèi)不變混濁；

②顯微鏡下可以看見細胞之間或是培養(yǎng)液中，有縱橫交錯穿行的絲狀，樹枝狀或管狀菌絲；

③多數(shù)菌絲在高倍鏡下可以觀察到鏈狀排列的菌株，而念珠菌及酵母菌菌株呈卵圓形，散落在細胞上及細胞周邊生長。

當(dāng)細胞出現(xiàn)上述癥狀時，基本可以斷定，細胞發(fā)生了真菌污染。

二、細胞污染的解決辦法

1、細胞培養(yǎng)發(fā)生細菌污染了怎么辦？

細胞發(fā)生細菌污染時，需要將細胞丟棄，并對培養(yǎng)環(huán)境徹底消毒。國際上大多數(shù)實驗室會使用Mycoplasma-off?噴霧劑（或濕巾），對超凈臺、培養(yǎng)箱等環(huán)境進行徹底消殺。

2、細胞培養(yǎng)發(fā)生支原體污染了怎么辦？

對與支原體污染的細胞，優(yōu)先考慮丟掉細胞，重新培養(yǎng)。

①對于非常珍貴的細胞株（不可再得的）國際上使用Mynox? Gold，做4周左右的支原體祛除持續(xù)培養(yǎng)實驗。

②對于非常珍貴的細胞株或生物樣品（無法長期培養(yǎng)的），可使用Mynox?，對細胞做3小時左右的祛除支原體處理，處理完畢，沖洗細胞，將樣品放入潔凈的培養(yǎng)液中，重新培養(yǎng)或保存即可。

③對于已經(jīng)進行到中途的細胞實驗，如果將培養(yǎng)的大量細胞丟棄，會造成高昂的實驗成本損失。對于這樣的情況，補救辦法如下：在培養(yǎng)液中加入10%的Zell Shield?（一種新型復(fù)合抗生素）。按照廠家建議的方法，配合處理細胞，培養(yǎng)4代以上，基本可祛除支原體污染。

④一些做原代培養(yǎng)的實驗室，為了預(yù)防取原代細胞過程中可能會發(fā)生支原體污染，實驗人員也可以在培養(yǎng)液中加入10%的Zell Shield?（一種新型復(fù)合抗生素），培養(yǎng)4代以上，即可撤掉Zell Shield?，此過程可有效預(yù)防支原體污染的發(fā)生。

3、細胞培養(yǎng)發(fā)生真菌污染了怎么辦？

細胞發(fā)生真菌污染時，需要將細胞丟棄，并對培養(yǎng)環(huán)境徹底消毒，國際上大多數(shù)實驗室會使用Mycoplasma-off?噴霧劑，對超凈臺、培養(yǎng)箱等環(huán)境進行徹底消殺。

三、加強細胞間管理，是解決細胞污染真正有效的方法

匯總了各大實驗室的工作流程：

1、在正式進入細胞間前，需要在緩沖隔離間佩戴好細胞實驗室專用的防護用具：口罩、防護服、鞋套等，開始實驗前，佩戴好手套。

2、定期使用Mycoplasma-off?噴霧劑（或濕巾），對工作區(qū)域徹底消殺（建議半個月一次，但需根據(jù)細胞間實際使用頻率決定）。

3、每次實驗開始前，和實驗結(jié)束后，用紫外線對細胞間進行照射消毒，實驗操作前用酒精或Mycoplasma-off?噴霧劑對操作人員的手套進行噴涂消毒。

4、在水浴鍋或培養(yǎng)箱水槽的水中，加入0.5%的Water Shield?，可確保一個月內(nèi)水源不會變成支原體、真菌或細菌的污染源。

5、如果細胞間內(nèi)，發(fā)生多株細胞的聯(lián)合的支原體污染情況，建議在做上述1-4的操作的同時，將液氮罐，也用Mycoplasma-off?噴霧劑（或濕巾）進行徹底消殺，并更換潔凈的液氮，（液氮罐中凍存的細胞發(fā)生支原體污染，也會在液氮中引起污染的的傳播）。

上述內(nèi)容只分析了生物因素污染，在實際培養(yǎng)過程中，可能還會發(fā)生物理或化學(xué)污染，請自行排除，本文不再贅述。