細(xì)胞污染類型及解決辦法

本文匯總了細(xì)胞污染的主要類型及解決辦法

一、細(xì)胞污染的分類

1、細(xì)菌污染

①細(xì)胞培養(yǎng)基在短時(shí)間內(nèi)迅速渾濁；

②靜置的培養(yǎng)液時(shí)不渾濁，但稍加震蕩，就有許多渾濁物漂起；

③顯微鏡下可見(jiàn)培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒物漂浮；

④細(xì)胞停止生長(zhǎng)、出現(xiàn)大量死亡；

當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)上述癥狀時(shí)，基本可以斷定，細(xì)胞發(fā)生了細(xì)菌污染。

2、支原體污染

①生長(zhǎng)速率緩慢、活力下降、易脫壁；

②細(xì)胞形態(tài)改變；

③細(xì)胞易聚團(tuán)；

④在顯微鏡下，可見(jiàn)培養(yǎng)液中產(chǎn)生大量碎片（培養(yǎng)基不渾濁）；

⑤在培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)液很快變黃（意味著培養(yǎng)液中有看不見(jiàn)的大量微生物繁殖，營(yíng)養(yǎng)被消耗）；

由于支原體體型微小，在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，普通光學(xué)顯微鏡很難觀察到，只有在電鏡下才能拍到支原體的照片。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的支原體污染，會(huì)大量消耗培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)。98%會(huì)附著在細(xì)胞表面，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)發(fā)生異常，甚至引起死亡，最終導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)發(fā)生異常。

當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)上述癥狀時(shí)，基本可以斷定，細(xì)胞發(fā)生了支原體污染。

3、真菌污染

①在細(xì)胞培養(yǎng)液中會(huì)形成淡黃色或白色的漂浮物，肉眼可見(jiàn)，但培養(yǎng)液在短期內(nèi)不變混濁；

②顯微鏡下可以看見(jiàn)細(xì)胞之間或是培養(yǎng)液中，有縱橫交錯(cuò)穿行的絲狀，樹(shù)枝狀或管狀菌絲；

③多數(shù)菌絲在高倍鏡下可以觀察到鏈狀排列的菌株，而念珠菌及酵母菌菌株呈卵圓形，散落在細(xì)胞上及細(xì)胞周邊生長(zhǎng)。

當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)上述癥狀時(shí)，基本可以斷定，細(xì)胞發(fā)生了真菌污染。

二、細(xì)胞污染的解決辦法

1、細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)生細(xì)菌污染了怎么辦？

細(xì)胞發(fā)生細(xì)菌污染時(shí)，需要將細(xì)胞丟棄，并對(duì)培養(yǎng)環(huán)境徹底消毒。國(guó)際上大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室會(huì)使用Mycoplasma-off?噴霧劑（或濕巾），對(duì)超凈臺(tái)、培養(yǎng)箱等環(huán)境進(jìn)行徹底消殺。

2、細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)生支原體污染了怎么辦？

對(duì)與支原體污染的細(xì)胞，優(yōu)先考慮丟掉細(xì)胞，重新培養(yǎng)。

①對(duì)于非常珍貴的細(xì)胞株（不可再得的）國(guó)際上使用Mynox? Gold，做4周左右的支原體祛除持續(xù)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。

②對(duì)于非常珍貴的細(xì)胞株或生物樣品（無(wú)法長(zhǎng)期培養(yǎng)的），可使用Mynox?，對(duì)細(xì)胞做3小時(shí)左右的祛除支原體處理，處理完畢，沖洗細(xì)胞，將樣品放入潔凈的培養(yǎng)液中，重新培養(yǎng)或保存即可。

③對(duì)于已經(jīng)進(jìn)行到中途的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，如果將培養(yǎng)的大量細(xì)胞丟棄，會(huì)造成高昂的實(shí)驗(yàn)成本損失。對(duì)于這樣的情況，補(bǔ)救辦法如下：在培養(yǎng)液中加入10%的Zell Shield?（一種新型復(fù)合抗生素）。按照廠家建議的方法，配合處理細(xì)胞，培養(yǎng)4代以上，基本可祛除支原體污染。

④一些做原代培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室，為了預(yù)防取原代細(xì)胞過(guò)程中可能會(huì)發(fā)生支原體污染，實(shí)驗(yàn)人員也可以在培養(yǎng)液中加入10%的Zell Shield?（一種新型復(fù)合抗生素），培養(yǎng)4代以上，即可撤掉Zell Shield?，此過(guò)程可有效預(yù)防支原體污染的發(fā)生。

3、細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)生真菌污染了怎么辦？

細(xì)胞發(fā)生真菌污染時(shí)，需要將細(xì)胞丟棄，并對(duì)培養(yǎng)環(huán)境徹底消毒，國(guó)際上大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室會(huì)使用Mycoplasma-off?噴霧劑，對(duì)超凈臺(tái)、培養(yǎng)箱等環(huán)境進(jìn)行徹底消殺。

三、加強(qiáng)細(xì)胞間管理，是解決細(xì)胞污染真正有效的方法

匯總了各大實(shí)驗(yàn)室的工作流程：

1、在正式進(jìn)入細(xì)胞間前，需要在緩沖隔離間佩戴好細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室專用的防護(hù)用具：口罩、防護(hù)服、鞋套等，開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前，佩戴好手套。

2、定期使用Mycoplasma-off?噴霧劑（或濕巾），對(duì)工作區(qū)域徹底消殺（建議半個(gè)月一次，但需根據(jù)細(xì)胞間實(shí)際使用頻率決定）。

3、每次實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，和實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用紫外線對(duì)細(xì)胞間進(jìn)行照射消毒，實(shí)驗(yàn)操作前用酒精或Mycoplasma-off?噴霧劑對(duì)操作人員的手套進(jìn)行噴涂消毒。

4、在水浴鍋或培養(yǎng)箱水槽的水中，加入0.5%的Water Shield?，可確保一個(gè)月內(nèi)水源不會(huì)變成支原體、真菌或細(xì)菌的污染源。

5、如果細(xì)胞間內(nèi)，發(fā)生多株細(xì)胞的聯(lián)合的支原體污染情況，建議在做上述1-4的操作的同時(shí)，將液氮罐，也用Mycoplasma-off?噴霧劑（或濕巾）進(jìn)行徹底消殺，并更換潔凈的液氮，（液氮罐中凍存的細(xì)胞發(fā)生支原體污染，也會(huì)在液氮中引起污染的的傳播）。

上述內(nèi)容只分析了生物因素污染，在實(shí)際培養(yǎng)過(guò)程中，可能還會(huì)發(fā)生物理或化學(xué)污染，請(qǐng)自行排除，本文不再贅述。