PCR法在雞毒支原體污染檢測方法

雞毒支原體（Mycoplasma gallisepticum，MG）是一種常見的雞呼吸道病原體，可引起雞的慢性呼吸道疾病，嚴重影響雞的生產性能和健康狀況。因此，對雞毒支原體污染進行準確檢測至關重要。本文將介紹使用PCR法進行雞毒支原體污染檢測的方法。

PCR法是一種基于DNA體外擴增的技術，通過特定的引物和DNA聚合酶，將特定的DNA片段在體外進行指數級擴增。PCR法具有高特異性、高靈敏度和快速等優點，可用于檢測樣品中微量的DNA片段。

PCR法檢測雞毒支原體污染

樣品采集：采集雞的呼吸道分泌物、雞胚尿囊液和雞場環境樣本等，用于檢測雞毒支原體污染。

DNA提取：將采集的樣品進行處理，提取其中的DNA片段。可使用德國MB DNA提取試劑盒進行提取。

引物設計：根據雞毒支原體基因組序列設計特異性引物，用于擴增特定的DNA片段。通常擴增的目標基因片段為100-300bp。

試劑制備：

PCR體系建立：

啟動PCR反應：

電泳結果分析：

191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時，由于內控對照與支原體DNA存在競爭，內控對照條帶變弱（例如支原體DNA＞10^3拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞10^4拷貝，內控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結果。

如果待測樣本對PCR產生抑制，則內控對照條帶變弱（和陰性對照相比），此時應先進行DNA抽提（推薦使用：Venor? Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

德國MB公司生產的支原體常規PCR檢測試劑盒，依據操作步驟的細微差別，分一步法和經典法兩類。此兩類試劑盒較全球其他廠家同類產品，具有以下獨特的優點：

①符合歐洲藥典要求。

②高特異性，一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體），根據序列一致性，至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單，易于觀察（使用MB的試劑盒，下表中列出的支原體物種均為陽性，其他微生物或真核細胞均為陰性，無交叉反應）。

③高靈敏度，1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。

④試劑盒含內控對照，可防止假陰性的發生。