熒光定量PCR檢測方法在細胞和病毒活疫苗中支原體污染的應用

在生物學研究及生物制品生產(chǎn)中易發(fā)生支原體污染，根據(jù)我國藥典法和歐洲藥典法的要求，需要使用一種簡便快速、特異敏感的支原體檢驗PCR方法。可使用德國MB支原體熒光定量PCR檢測試劑盒進行建立的熒光PCR檢測方法。

支原體熒光定量PCR法（qPCR）：是在常規(guī)PCR基礎上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記，使PCR擴增后的產(chǎn)物帶有熒光，利用熒光信號的變化和配套軟件，進行DNA擴增反應的實時監(jiān)測，簡稱qPCR。

德國MB公司生產(chǎn)的支原體qPCR檢測試劑盒（均為探針法檢測），依據(jù)操作步驟的細微差別， 分『經(jīng)典法』和『一步法』兩種。   

支原體熒光定量PCR法優(yōu)點：

①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性，一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體），根據(jù)序列一致性，至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單，易于觀察（使用MB的試劑盒，下表中列出的支原體物種均為陽性，其他微生物或真核細胞均為陰性，無交叉反應）。

③高靈敏度，MB公司的支原體qPCR檢測試劑盒經(jīng)典法最低檢測限可達到≤10CFU/ml。

MB公司的支原體qPCR檢測試劑盒一步法最低檢測限≥50個基因組/反應。

④MB公司有相應配套的10CFU/100CFU的敏感度測試的標準品，便于方法學驗證。

⑤MB公司有相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA，便于特異性驗證。

⑥MB公司有相應配套的支原體絕對定量標準品，便于最后定量檢測。

支原體qPCR檢測試劑盒特點

1.內(nèi)控對照為獨立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2.高特異性，一次檢測即可涵蓋所有常見易感染細胞的支原體物種（包括歐洲藥典規(guī)定的9種支原體）。與細菌和真核DNA無交叉反應。

3.高靈敏度，最低檢測限可達到≤10CFU/ml。

4.相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA，便于特異性驗證。

5.有相應配套的支原體絕對定量標準品，便于最后定量檢測。

使用德國MB支原體熒光定量PCR檢測試劑盒建立的支原體PCR檢測方法特異性強、敏感性高、重復性好、簡單快速,為細胞及病毒活疫苗中可能的支原體污染提供了一種準確可靠的快速檢測方法。