熒光定量PCR檢測方法在細(xì)胞和病毒活疫苗中支原體污染的應(yīng)用

在生物學(xué)研究及生物制品生產(chǎn)中易發(fā)生支原體污染，根據(jù)我國藥典法和歐洲藥典法的要求，需要使用一種簡便快速、特異敏感的支原體檢驗(yàn)PCR方法。可使用德國MB支原體熒光定量PCR檢測試劑盒進(jìn)行建立的熒光PCR檢測方法。

支原體熒光定量PCR法（qPCR）：是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標(biāo)記，使PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物帶有熒光，利用熒光信號的變化和配套軟件，進(jìn)行DNA擴(kuò)增反應(yīng)的實(shí)時監(jiān)測，簡稱qPCR。

德國MB公司生產(chǎn)的支原體qPCR檢測試劑盒（均為探針法檢測），依據(jù)操作步驟的細(xì)微差別， 分『經(jīng)典法』和『一步法』兩種。   

支原體熒光定量PCR法優(yōu)點(diǎn)：

①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性，一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細(xì)胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體），根據(jù)序列一致性，至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單，易于觀察（使用MB的試劑盒，下表中列出的支原體物種均為陽性，其他微生物或真核細(xì)胞均為陰性，無交叉反應(yīng)）。

③高靈敏度，MB公司的支原體qPCR檢測試劑盒經(jīng)典法最低檢測限可達(dá)到≤10CFU/ml。

MB公司的支原體qPCR檢測試劑盒一步法最低檢測限≥50個基因組/反應(yīng)。

④MB公司有相應(yīng)配套的10CFU/100CFU的敏感度測試的標(biāo)準(zhǔn)品，便于方法學(xué)驗(yàn)證。

⑤MB公司有相應(yīng)配套的支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA，便于特異性驗(yàn)證。

⑥MB公司有相應(yīng)配套的支原體絕對定量標(biāo)準(zhǔn)品，便于最后定量檢測。

支原體qPCR檢測試劑盒特點(diǎn)

1.內(nèi)控對照為獨(dú)立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2.高特異性，一次檢測即可涵蓋所有常見易感染細(xì)胞的支原體物種（包括歐洲藥典規(guī)定的9種支原體）。與細(xì)菌和真核DNA無交叉反應(yīng)。

3.高靈敏度，最低檢測限可達(dá)到≤10CFU/ml。

4.相應(yīng)配套的支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA，便于特異性驗(yàn)證。

5.有相應(yīng)配套的支原體絕對定量標(biāo)準(zhǔn)品，便于最后定量檢測。

使用德國MB支原體熒光定量PCR檢測試劑盒建立的支原體PCR檢測方法特異性強(qiáng)、敏感性高、重復(fù)性好、簡單快速,為細(xì)胞及病毒活疫苗中可能的支原體污染提供了一種準(zhǔn)確可靠的快速檢測方法。