DNA聚合酶vs熱啟動DNA聚合酶

PCR反應(yīng)的核心成分當(dāng)然是DNA聚合酶了，常見的DNA聚合酶如Taq、Pfu、KOD、Primerstar等，常溫聚合酶包括Klenow、Bst、Phi29等。根據(jù)保真度來分，高保真聚合酶Pfu、KOD、Phanta等，普通聚合酶Taq等。那這么多DNA聚合酶，該如何選呢？

在使用Taq酶進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，有時(shí)會出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，可能的原因可以從模板、引物、體系、程序中一一排查。如模板是否被污染，引物特異性如何，Mg2+濃度偏高等等，其中一個(gè)不可忽視的原因是DNA聚合酶的種類是否合適。如果排查了其它原因仍舊有非特異性產(chǎn)物，可以選擇熱啟動酶重新實(shí)驗(yàn)，即可有效減少或消除體系中其它產(chǎn)物的積累。常用的熱啟動酶分為兩類：一類是化學(xué)法修飾的熱啟動酶，如Ace Taq ，預(yù)變性95℃5-10min即可釋放酶活；一類是抗體法修飾的熱啟動酶，如Champagne Taq ，預(yù)變性95℃30s即可釋放酶活。使用時(shí)注意預(yù)變性時(shí)間，方能獲得滿意的擴(kuò)增效果。

締一生物提供的德國M產(chǎn)品，熱啟動DNA聚合酶 MB TAQ DNA Polymerase

MB Taq DNA聚合酶是一種高效的5‘→3’聚合酶，沒有3‘→5’外切核酸酶活性。在72℃和pH9的條件下，MB Taq DNA聚合酶達(dá)到其最高水平的活性，能夠在30秒內(nèi)擴(kuò)增1 kb DNA。

Taq的活性在室溫時(shí)被阻斷，例如在準(zhǔn)備樣品時(shí)。當(dāng)溫度高于70℃時(shí)，Taq聚合酶的抑制被完全逆轉(zhuǎn)。在94℃2分鐘后聚合酶達(dá)到完全活化。MBTaq DNA聚合酶帶有10x緩沖液，能獲得**產(chǎn)率和靈敏度，這應(yīng)符合大多數(shù)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用。

MB熱啟動DNA聚合酶推薦使用/范圍

常規(guī)和多重PCR；實(shí)時(shí)PCR；T/A克隆；生物素/地高辛或放射性核苷酸進(jìn)行DNA標(biāo)記；雙鏈或單鏈標(biāo)準(zhǔn)DNA測序。

試劑盒組分

MB Taq DNA聚合酶，提供在10mM Tris-HCl（pH7.0），50mM KCl，0.1mM EDTA和50％（v / v）甘油中。 10X反應(yīng)緩沖液。100mMMgCl 2溶液。

如果聚合酶與Venor?GeM或Venor?GeM Advance聯(lián)合使用，則不需要使用緩沖液。

保質(zhì)期和儲存

組分必須儲存在-18°C。冰袋運(yùn)輸。該產(chǎn)品穩(wěn)定至少6個(gè)月。

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