支原體PCR檢測(cè)造成“假陽”的原因

PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）技術(shù)具有高度的敏感性和特異性，但在支原體檢測(cè)中，有的時(shí)候還是操作失誤或者不知什么原因就導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性。

假陽性現(xiàn)象

假陽性是指檢測(cè)陰性材料得到陽性結(jié)果。如果一次實(shí)驗(yàn)中的幾個(gè)陰性對(duì)照中出現(xiàn)一個(gè)或幾個(gè)陽性結(jié)果，提示本次實(shí)驗(yàn)中其它標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果可能有假陽性。

實(shí)驗(yàn)中設(shè)立的陰性對(duì)照可提示有無假陽性結(jié)果出現(xiàn)。

造成假陽性的原因

1. 樣品間交叉污染：樣本污染主要有收集樣本的容器被污染，或樣本放置時(shí)，由于密封不嚴(yán)溢于容器外，或容器外粘有樣本而造成相互間交叉污染；

樣本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導(dǎo)致標(biāo)本間污染；

2. PCR試劑的污染：主要是由于在PCR試劑配制過程中，由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。

3. PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染：這是PCR反應(yīng)中最主要最常見的污染問題。因?yàn)?/span>PCR產(chǎn)物拷貝量大，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限，所以極微量的PCR產(chǎn)物污染，就可形成假陽性。

4. 氣溶膠污染：在空氣與液體面摩擦?xí)r就可形成氣溶膠，在操作時(shí)比較劇烈地?fù)u動(dòng)反應(yīng)管，開蓋時(shí)、吸樣時(shí)及污染進(jìn)樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染。

據(jù)計(jì)算一個(gè)氣溶膠顆粒可含48000拷貝，因而由其造成的污染是一個(gè)值得特別重視的問題。

5. 實(shí)驗(yàn)室中克隆質(zhì)粒的污染：由于克隆質(zhì)粒在單位容積內(nèi)含量相當(dāng)高，另外在純化過程中需用較多的用具及試劑，而且在活細(xì)胞內(nèi)的質(zhì)粒，由于活細(xì)胞的生長繁殖的簡便性及具有很強(qiáng)的生命力，其污染可能性也很大。

在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室及某些用克隆質(zhì)粒做陽性對(duì)照的檢驗(yàn)室，這個(gè)問題比較常見。

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特點(diǎn)

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3.高靈敏度。

4.有相應(yīng)配套的支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA，便于特異性驗(yàn)證。

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