支原體PCR檢測造成“假陽”的原因

PCR（聚合酶鏈反應）技術具有高度的敏感性和特異性，但在支原體檢測中，有的時候還是操作失誤或者不知什么原因就導致出現假陽性。

假陽性現象

假陽性是指檢測陰性材料得到陽性結果。如果一次實驗中的幾個陰性對照中出現一個或幾個陽性結果，提示本次實驗中其它標本的檢測結果可能有假陽性。

實驗中設立的陰性對照可提示有無假陽性結果出現。

造成假陽性的原因

1. 樣品間交叉污染：樣本污染主要有收集樣本的容器被污染，或樣本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有樣本而造成相互間交叉污染；

樣本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導致標本間污染；

2. PCR試劑的污染：主要是由于在PCR試劑配制過程中，由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。

3. PCR擴增產物污染：這是PCR反應中最主要最常見的污染問題。因為PCR產物拷貝量大，遠遠高于PCR檢測數個拷貝的極限，所以極微量的PCR產物污染，就可形成假陽性。

4. 氣溶膠污染：在空氣與液體面摩擦時就可形成氣溶膠，在操作時比較劇烈地搖動反應管，開蓋時、吸樣時及污染進樣槍的反復吸樣都可形成氣溶膠而污染。

據計算一個氣溶膠顆粒可含48000拷貝，因而由其造成的污染是一個值得特別重視的問題。

5. 實驗室中克隆質粒的污染：由于克隆質粒在單位容積內含量相當高，另外在純化過程中需用較多的用具及試劑，而且在活細胞內的質粒，由于活細胞的生長繁殖的簡便性及具有很強的生命力，其污染可能性也很大。

在分子生物學實驗室及某些用克隆質粒做陽性對照的檢驗室，這個問題比較常見。

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