支原體檢測常規(guī)方法的缺點

在養(yǎng)細(xì)胞的過程中，支原體由于自身微小，容易生長，它總是悄悄的來，對細(xì)胞造成生長緩慢、生長狀態(tài)差甚至衰亡。那有什么方法可以檢測支原體呢？今天分享的就是常規(guī)的支原體檢測方法的缺點。

支原體檢測方法有哪些？

1: 分離培養(yǎng)法 缺點：支原體生長到一定數(shù)量才能判斷是否有污染，檢測時間長，無法實現(xiàn)對支原體的快速檢測。

2: 原位染色法 缺點：死亡細(xì)胞釋放的DNA也會被染色，在支原體輕度污染時，較難判斷是否有支原體污染。

3: 化學(xué)發(fā)光法 缺點：該方法只能檢測活的支原體，如果支原體死亡，將無法通過ATP的變化判斷支原體污染。

4: 巢式PCR法缺點：操作繁瑣，需要進(jìn)行兩輪PCR。

5: 等溫擴增變色法缺點：對引物要求較高，需要設(shè)計多對引物，且擴增產(chǎn)物不能用于測序。

北京締一生物科技有限公司國內(nèi)總代理的德國MB 產(chǎn)品

qPCR Kit   (經(jīng)典法)   Venor Gem qEP

支原體熒光定量PCR又稱，qPCR法：

支原體熒光定量PCR法（qPCR）：是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標(biāo)記，使PCR擴增后的產(chǎn)物帶有熒光，利用熒光信號的變化和配套軟件，進(jìn)行DNA擴增反應(yīng)的實時監(jiān)測，簡稱qPCR。

優(yōu)點：

①靈敏度高、特異性強。

②時間短，2-3小時出結(jié)果

③檢測結(jié)果可定量

④操作簡便

缺點：

①對于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結(jié)果會出現(xiàn)假陽性。（可用培養(yǎng)法做補充驗證）

②不同廠家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大（由于引物及內(nèi)在設(shè)計不同），需謹(jǐn)慎選擇，盡量在專業(yè)人員推薦指導(dǎo)下使用。

德國MB公司生產(chǎn)的支原體qPCR檢測試劑盒（均為探針法檢測），依據(jù)操作步驟的細(xì)微差別， 分『經(jīng)典法』和『一步法』兩種。   

此兩類試劑盒較全球其他廠家同類產(chǎn)品，具有以下獨特的優(yōu)點：

①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性，一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細(xì)胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體），根據(jù)序列一致性，至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單，易于觀察（使用MB的試劑盒，下表中列出的支原體物種均為陽性，其他微生物或真核細(xì)胞均為陰性，無交叉反應(yīng)）。