支原體檢測常規方法的缺點

在養細胞的過程中，支原體由于自身微小，容易生長，它總是悄悄的來，對細胞造成生長緩慢、生長狀態差甚至衰亡。那有什么方法可以檢測支原體呢？今天分享的就是常規的支原體檢測方法的缺點。

支原體檢測方法有哪些？

1: 分離培養法 缺點：支原體生長到一定數量才能判斷是否有污染，檢測時間長，無法實現對支原體的快速檢測。

2: 原位染色法 缺點：死亡細胞釋放的DNA也會被染色，在支原體輕度污染時，較難判斷是否有支原體污染。

3: 化學發光法 缺點：該方法只能檢測活的支原體，如果支原體死亡，將無法通過ATP的變化判斷支原體污染。

4: 巢式PCR法缺點：操作繁瑣，需要進行兩輪PCR。

5: 等溫擴增變色法缺點：對引物要求較高，需要設計多對引物，且擴增產物不能用于測序。

北京締一生物科技有限公司國內總代理的德國MB 產品

qPCR Kit   (經典法)   Venor Gem qEP

支原體熒光定量PCR又稱，qPCR法：

支原體熒光定量PCR法（qPCR）：是在常規PCR基礎上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記，使PCR擴增后的產物帶有熒光，利用熒光信號的變化和配套軟件，進行DNA擴增反應的實時監測，簡稱qPCR。

優點：

①靈敏度高、特異性強。

②時間短，2-3小時出結果

③檢測結果可定量

④操作簡便

缺點：

①對于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結果會出現假陽性。（可用培養法做補充驗證）

②不同廠家生產的試劑盒質量差異巨大（由于引物及內在設計不同），需謹慎選擇，盡量在專業人員推薦指導下使用。

德國MB公司生產的支原體qPCR檢測試劑盒（均為探針法檢測），依據操作步驟的細微差別， 分『經典法』和『一步法』兩種。   

此兩類試劑盒較全球其他廠家同類產品，具有以下獨特的優點：

①經典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性，一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體），根據序列一致性，至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單，易于觀察（使用MB的試劑盒，下表中列出的支原體物種均為陽性，其他微生物或真核細胞均為陰性，無交叉反應）。