『支原體標準品』質控大揭秘

Minerva Biolabs支原體檢測標準品

德國MB公司出品有一系列常見支原體或支原體基因組DNA的標準品，包括靈敏度標準品（10CFU,100CFU）、特異性標準品以及PCR定量標準品，其中靈敏度標準品也可用于耐用性的驗證。

MB廠家具有ISO 9001和ISO 13485質量體系認證。每個批次支原體標準品都有驗證和質控。同時支原體培養所用的培養基每個批次都符合歐洲藥品質量管理局（EDQM）的標準。標準品每個批次都提供有質控證書（COA）。標準品所用的支原體菌株來自英國NCTC菌種保藏中心，同時具有相應的ATCC編號。

MB共有以下三類標準品，在質控方面都做到高標準、嚴要求。

一、支原體靈敏度標準品

二、支原體特異性標準品

三、PCR定量標準品

10CFU/100CFU支原體靈敏度標準品為滅活支原體，用于核酸法的靈敏度和耐用性驗證。靈敏度標準品主要在功能檢測方面的進行質控：

功能檢測：

即標準品復溶后作DNA抽提（采用MB公司的Venor?GeM Sample Preparation Kit），再用符合藥典標準的qPCR試劑盒檢測，應保證有擴增曲線。

該基因組DNA是從相應的支原體中抽提出來，并制成凍干粉。每管為10ng左右，用于支原體特異性驗證實驗。

復溶時，每管加配套的Tris緩沖液，室溫靜置5分鐘，再渦旋離心5秒鐘。

廠家對基因組中的16S rRNA片段進行了序列分析，要求應與相應支原體物種的同源性應達到99%以上。對制備的DNA質量和數量進行了熒光分析和PCR擴增。PCR擴增應顯示為單一的擴增條帶。

每管為1x10^8拷貝的支原體物種基因組DNA凍干粉，使用時也是先用廠家提供的Tris緩沖液復溶。

質控時，對16S rRNA的部分序列進行測序分析，以鑒定支原體物種，測序結果應顯示為99%以上的同源性。再對該標準品作系列梯度稀釋，再進行qPCR擴增，應顯示為良好的線性。該方法還可確定qPCR方法的檢測閾值。

MB公司的上述三類標準品可用于對支原體核酸法的方法學驗證，包括靈敏度、特異性和耐用性。其中，基因組DNA除了包括常見支原體物種外，還包括一些常見細菌，用于驗證常規PCR或qPCR的檢測是否會產生交叉反應。

總之，良好的質控是標準品品質的保證，這樣才能確保方法驗證結果的可靠性，使支原體的核酸法檢測符合藥典所規定的標準，從而為替代培養法等經典支原體的檢測方法提供數據支持。