支原體放行檢測(cè)步驟

在臨床相關(guān)的項(xiàng)目中支原體放行檢測(cè)發(fā)揮著重要的作用。由于臨床項(xiàng)目研究的時(shí)效性與安全性，對(duì)于支原體檢測(cè)的效率以及準(zhǔn)確度都有比較高的要求。今天分享的是結(jié)合德國(guó)MB支原體檢測(cè)產(chǎn)品進(jìn)行支原體放行檢測(cè)的方法步驟。

支原體DNA提取

如果樣品的細(xì)胞培養(yǎng)液中，存在抑制PCR的物質(zhì)，比如較高濃度的血清濃度（超過12%），則容易對(duì)下游的PCR反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生抑制，此時(shí)就需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理，也就是對(duì)支原體DNA進(jìn)行提取處理，以減輕對(duì)PCR反應(yīng)的影響。

另外，酚紅、細(xì)胞團(tuán)、疫苗、凍存細(xì)胞和石蠟包埋的組織，也會(huì)對(duì)qPCR的檢測(cè)產(chǎn)生干擾，因此也需要提前對(duì)支原體DNA進(jìn)行提取

如果樣品中蛋白含量高于10mg/ml，則先需將樣品預(yù)先用蛋白酶K進(jìn)行處理。

Miverva Biolabs公司的支原體DNA提取試劑盒，通過對(duì)DNA的提取，來提高檢測(cè)的準(zhǔn)確率。

Minerva Biolabs公司生產(chǎn)的Venor?GeM Sample Preparation Kit可從細(xì)胞上清和生物制品中分離支原體DNA，全程只需30分鐘。

分四步組成：細(xì)胞溶解，DNA特異性與層析柱結(jié)合，祛除殘留的污染物和抑制劑，洗脫DNA。該試劑盒符合歐洲藥典規(guī)范。

支原體qPCR檢測(cè)

藥典中記載的傳統(tǒng)的支原體檢查方法，如培養(yǎng)法和DNA染色法，都存在一定的局限：培養(yǎng)法大約需要7-29天，DNA染色法大約需要4-14天才能出結(jié)果，所需時(shí)間較長(zhǎng)，且DNA染色法還存在假陽(yáng)性和假陰性情況。

支原體核酸檢測(cè)法（包括常規(guī)PCR和熒光定量PCR，簡(jiǎn)稱qPCR）是一種較早被國(guó)外采用的檢測(cè)方法，以其操作時(shí)間短（僅需2-3小時(shí)）、靈敏度和特異性高而深受相關(guān)從業(yè)人員的喜愛，藥典中也明確指出，經(jīng)過驗(yàn)證，核酸法可替代指示細(xì)胞法進(jìn)行支原體檢測(cè)。

國(guó)內(nèi)外藥廠放行檢測(cè)（product release testing）采用的較多的是德國(guó)Minerva Biolabs(簡(jiǎn)稱MB)公司的Venor? Gem qEP (qPCR法)，無須跑膠，且能定量，使用起來更為便捷，通過歐洲藥典和日本藥典的方法學(xué)驗(yàn)證。

支原體標(biāo)準(zhǔn)品

標(biāo)準(zhǔn)品就像支原體檢測(cè)過程中的一把標(biāo)尺，能夠衡量方法是否達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，合乎要求。藥典中也規(guī)定了，如果要用核酸法替代藥典方法，也需要進(jìn)行驗(yàn)證，即靈敏度、特異性以及耐用性等都需要達(dá)到指定的要求。方法達(dá)到要求之后才能夠用于質(zhì)檢部門對(duì)樣品的檢查。國(guó)MB公司（Minerva Biolabs）提供有三類標(biāo)準(zhǔn)品：靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品、特異性驗(yàn)證用標(biāo)準(zhǔn)品，以及支原體DNA。

標(biāo)準(zhǔn)品與支原體DNA提取試劑盒、支原體qPCR檢測(cè)試劑盒，共同構(gòu)成完整的檢測(cè)體系，幫助從業(yè)者實(shí)現(xiàn)高效便捷準(zhǔn)確的支原體檢測(cè)