支原體放行檢測步驟

在臨床相關的項目中支原體放行檢測發揮著重要的作用。由于臨床項目研究的時效性與安全性，對于支原體檢測的效率以及準確度都有比較高的要求。今天分享的是結合德國MB支原體檢測產品進行支原體放行檢測的方法步驟。

支原體DNA提取

如果樣品的細胞培養液中，存在抑制PCR的物質，比如較高濃度的血清濃度（超過12%），則容易對下游的PCR反應會產生抑制，此時就需要對樣品進行預處理，也就是對支原體DNA進行提取處理，以減輕對PCR反應的影響。

另外，酚紅、細胞團、疫苗、凍存細胞和石蠟包埋的組織，也會對qPCR的檢測產生干擾，因此也需要提前對支原體DNA進行提取

如果樣品中蛋白含量高于10mg/ml，則先需將樣品預先用蛋白酶K進行處理。

Miverva Biolabs公司的支原體DNA提取試劑盒，通過對DNA的提取，來提高檢測的準確率。

Minerva Biolabs公司生產的Venor?GeM Sample Preparation Kit可從細胞上清和生物制品中分離支原體DNA，全程只需30分鐘。

分四步組成：細胞溶解，DNA特異性與層析柱結合，祛除殘留的污染物和抑制劑，洗脫DNA。該試劑盒符合歐洲藥典規范。

支原體qPCR檢測

藥典中記載的傳統的支原體檢查方法，如培養法和DNA染色法，都存在一定的局限：培養法大約需要7-29天，DNA染色法大約需要4-14天才能出結果，所需時間較長，且DNA染色法還存在假陽性和假陰性情況。

支原體核酸檢測法（包括常規PCR和熒光定量PCR，簡稱qPCR）是一種較早被國外采用的檢測方法，以其操作時間短（僅需2-3小時）、靈敏度和特異性高而深受相關從業人員的喜愛，藥典中也明確指出，經過驗證，核酸法可替代指示細胞法進行支原體檢測。

國內外藥廠放行檢測（product release testing）采用的較多的是德國Minerva Biolabs(簡稱MB)公司的Venor? Gem qEP (qPCR法)，無須跑膠，且能定量，使用起來更為便捷，通過歐洲藥典和日本藥典的方法學驗證。

支原體標準品

標準品就像支原體檢測過程中的一把標尺，能夠衡量方法是否達到標準，合乎要求。藥典中也規定了，如果要用核酸法替代藥典方法，也需要進行驗證，即靈敏度、特異性以及耐用性等都需要達到指定的要求。方法達到要求之后才能夠用于質檢部門對樣品的檢查。國MB公司（Minerva Biolabs）提供有三類標準品：靈敏度標準品、特異性驗證用標準品，以及支原體DNA。

標準品與支原體DNA提取試劑盒、支原體qPCR檢測試劑盒，共同構成完整的檢測體系，幫助從業者實現高效便捷準確的支原體檢測