熒光定量PCR和數(shù)字PCR的區(qū)別

數(shù)字PCR和熒光定量PCR區(qū)別如下：

原理：

數(shù)字PCR是將標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)分配到數(shù)萬(wàn)至數(shù)十萬(wàn)微液滴中，每個(gè)微液滴不包含或包含一個(gè)拷貝目標(biāo)（DNA模板），實(shí)現(xiàn)“單分子模板PCR擴(kuò)增”，擴(kuò)增結(jié)束后，對(duì)呈現(xiàn)陰、陽(yáng)性微液滴數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，由泊松分布計(jì)算出靶分子的起始拷貝數(shù)，實(shí)現(xiàn)起始DNA模板的絕對(duì)定量和超靈敏檢測(cè)。

熒光定量PCR是通過(guò)對(duì)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)檢測(cè)從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板定量及定性的分析。

應(yīng)用：

數(shù)字PCR主要應(yīng)用于液體活檢、拷貝數(shù)量變化分析、檢測(cè)少量病原體、檢測(cè)罕見基因突變、無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前診斷、食品轉(zhuǎn)基因檢測(cè)、環(huán)境檢測(cè)、第二代測(cè)序文庫(kù)分析等。

熒光定量PCR主要應(yīng)用于病原體的檢測(cè)和定量、基因表達(dá)的相對(duì)檢測(cè)、單核苷酸多態(tài)性分析、腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)等。

優(yōu)缺點(diǎn)：

數(shù)字PCR的優(yōu)點(diǎn)是絕對(duì)定量、無(wú)標(biāo)準(zhǔn)曲線、靈敏度高、對(duì)PCR抑制劑的耐受性更高，缺點(diǎn)是動(dòng)態(tài)范圍窄、成本高。

熒光定量PCR的優(yōu)點(diǎn)是動(dòng)態(tài)范圍寬、應(yīng)用范圍廣、成本低，缺點(diǎn)是擴(kuò)增效率容易受到PCR抑制劑的影響。

綜上所述，數(shù)字PCR和熒光定量PCR在原理、應(yīng)用和優(yōu)缺點(diǎn)方面存在明顯的區(qū)別。選擇使用哪種技術(shù)取決于具體的實(shí)驗(yàn)需求和條件。