高效清除細胞中的支原體污染的方法

在細胞培養(yǎng)過程中，支原體污染是一個常見且棘手的問題。支原體是一種介于細菌和病毒之間的原核生物，形態(tài)多樣，沒有細胞壁，且能夠直接穿過常規(guī)的除菌濾膜，因此極易造成細胞培養(yǎng)污染。支原體污染不僅會影響細胞的正常生長和代謝，還可能改變細胞的基因表達，干擾實驗結(jié)果，甚至導(dǎo)致實驗失敗。

一般情況下，細胞感染支原體，我們建議直接丟棄并對環(huán)境進行消毒處理，但總有一些特殊情況，導(dǎo)致我們不能丟棄辛苦培養(yǎng)的細胞，這時就可以派細胞用支原體祛除試劑上場了。

1、對于已發(fā)生支原體污染的細胞，不愿隨意丟棄，希望繼續(xù)培養(yǎng)時，可選擇Zell Shield?細胞支原體祛除試劑（貨號：13-0050/13-0150）。

如已轉(zhuǎn)染或大量擴增的細胞等情況，需要對已被支原體污染的細胞進行拯救。使用含有復(fù)合抗生素成分的Zell Shield?細胞支原體祛除試劑，可以抑制支原體蛋白和DNA合成，同時對細菌和真菌也有抑制作用。

先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法”處理好細胞，再使用加了Zell Shield?細胞支原體祛除試劑的培養(yǎng)基養(yǎng)細胞，按照使用說明進行操作，使用Zell Shield?細胞支原體祛除試劑培養(yǎng)4代后，細胞中的支原體即可祛除。

懸浮沖洗法及試劑使用方法：

（1）消化細胞：將培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中的細胞消化下來。

（2）離心：將消化好的細胞寄培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心管中，進行常規(guī)離心。

（3）清洗細胞：棄上清后，用無菌PBS輕柔吹打清洗細胞。

（4）重復(fù)清洗：將PBS和細胞的混合物進行低速離心，棄上清并重復(fù)清洗3次.

（5）重新培養(yǎng)：最后一次清洗結(jié)束后，棄掉PBS上清液，加入含有Zell Shield?細胞支原體祛除試劑的新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，4代后，細胞中的支原體即可祛除。

2、對于無法長期培養(yǎng)的珍貴樣本或病毒收獲液，則可以使用德國MB公司的Mynox?珍貴生物樣品支原體清除試劑（貨號: 10-0200/ 10-0500/ 10-1000）。

該試劑含有「治療液」和「鞏固防護液」。「治療液」來自枯草桿菌提取物，可特異性地與支原體膜結(jié)合，改變支原體膜通透性，從而使支原體在2-3小時內(nèi)破潰死亡；「鞏固防護液」加入培養(yǎng)基，后續(xù)培養(yǎng)一個月，細胞將會徹底清除支原體的污染，確切有效。

使用方法：

（1）細胞重新傳代時，用含Mynox?珍貴生物樣品支原體清除試劑、5%FBS的的培養(yǎng)基替換原有培養(yǎng)基，對細胞進行培養(yǎng)。

（2）孵育培養(yǎng)2-3小時。

（3）對細胞進行換液。

（4）用不含Mynox?的正常培養(yǎng)基（原始培養(yǎng)條件）對細胞進行培養(yǎng)，傳代3-4次。

（5）可對細胞進行支原體檢測，觀察細胞狀態(tài)。

3、對于可以培養(yǎng)超過一個月的珍貴細胞株，如果需要對其進行祛除支原體的處理，可以使用德國MB公司的Mynox? Gold珍貴細胞株支原體清除試劑（貨號：10-0201/ 10-0501/ 10-1001）。

該試劑分為直接殺除+鞏固防護兩步處理，祛除支原體的同時，可進一步在后續(xù)培養(yǎng)中鞏固清除效果，防止支原體“卷土重來”。

使用方法：

（1）治療液與含5%FBS的培養(yǎng)及混合

（2）將混合后的治療液添加至培養(yǎng)皿中

（3）將接種細胞

（4）培養(yǎng)細胞至80%-90%匯合后，進行傳代

（5）傳代的同時加入鞏固液

重復(fù)（4）（5）兩次

（6）在無Mynox? Gold的情況下傳代

（7）用Venor? Gem支原體檢測試劑盒檢測