三把利器快速解決細胞房支原體污染

快速解決細胞房支原體污染

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發表時間:2024-07-11 16:11

支原體又稱霉形體,支原體缺乏細胞壁,大小介于細菌與病毒兩者之間,能通過濾菌器,在無生命培養基上有強大的繁殖能力,是現在最小的原核細胞型微生物。對科研實驗室和生物制品工廠在細胞培養過程中特別容易受到支原體污染,有很多文獻報道,支原體污染在儲存細胞系中發生率約為15-35%,在生物制藥行業中約為0.44-6.70%。

細菌和真菌污染相對較容易檢測、預防和去除,但支原體造成的污染卻很難察覺,即使生長密度高達107-109CFU/ml,也很難有污染跡象(比如溶液渾濁、pH變化等)。支原體污染后能導致細胞產生多種變化:細胞死亡、抑制細胞生長、改變新陳代謝、改變細胞膜抗原性、染色體畸變、干擾核酸的合成、改變轉染的效率、抑制病毒的生產。德國Minerva Biolabs GmbH 公司在細胞培養和生物制藥領域的支原體、細菌和病毒污染控制收全球科研人好評,有完整的解決支原體問題的試劑,包括:支原體檢測系列、支原體清除(培養箱、水浴鍋、超凈臺和細胞房)、細胞支原體清除和支原體預防相關系列。

一、支原體DNA提取試劑盒

二、支原體檢測試劑盒

(一)常規PCR方法

(二)熒光定量PCR(qPCR)方法


二、方法驗證用支原體標準品(替代藥典方法需要驗證)

(一)靈敏度驗證用標準品

(二)支原體基因組DNA(拷貝數已標定)

(三)支原體基因組DNA(特異性驗證用)

三、方法驗證輔助產品


 四、支原體祛除

     一、細胞支原體祛除劑

  Zell Shield?支原體祛除劑(培養基用)?  英文名:Zell Shield?

  品牌:德國MB1. 適用范圍

 ?。?)細胞已發生支原體污染,但又不愿丟棄,希望繼續培養(如已轉染或大量擴增的細胞)。

  (2)初始培養的原代細胞。

 ?。?)存在支原體污染高風險的細胞。

  2. 用法:

  (1)1:100加入培養基。

 ?。?)當細胞存在支原體污染時,應先對細胞懸浮沖洗三次,再用含Zell Shield?培養基培養。每次傳代前都應做懸浮沖洗處理。連續傳代4次,支原體即可祛除。
     

  Mynox? Gold支原體祛除劑(珍貴細胞保種用)?  英文名:Mynox? Gold

  品牌:德國MB1. 適用范圍

  被支原體污染的珍貴細胞或不易獲得的生物樣本(如細胞種子)。

  2. 用法:

  步驟1. 將「治療液」加入到4.5ml培養基(FBS需≤5%)中,培養細胞(細胞數為104~105)。

  步驟2. 細胞長至80%-90%匯合時,細胞傳代。將1管「鞏固防護液」加到9.5ml培養基中,用該培養基繼續培養。

  步驟3. 重復步驟2,細胞再傳代2次,支原體即完全祛除。

  注意:每次傳代時,**都能把細胞懸浮沖洗三次,可取得更好的治療效果


  Mynox支原體祛除劑(珍貴樣本用)?  英文名:Mynox?

  品牌:德國MB1. 適用范圍

  被支原體污染的珍貴細胞、不易獲得的生物樣本或病毒收獲液(特別是不能長期培養的樣品)。

  2. 用法:

  (1)對于貼壁細胞:

  步驟1. 培養皿中加入200μl Mynox?和 2.8ml培養基中(FBS≤5%),混勻。

  步驟2. 再加入2ml細胞(細胞數為104~105,培養基中的FBS需≤5%)。

  步驟3. 細胞培養2小時,棄上清,換用新鮮培養基培養4代即可。

  (2)對于懸浮細胞:

  步驟1. 在離心管中加入200μl Mynox?和1.6ml胰酶(0.125 %,5 mM EDTA in PBS),混勻。

  步驟2. 加入1.6ml細胞(細胞數為104~105)。

  步驟3. 室溫靜置30min。

  步驟4. 600×g離心5min。棄上清,換用新鮮培養基培養4代即可。10-02002管/盒


  二、工作區域中支原體的祛除

  品名用途和用法貨號規格

  MB支原體祛除噴霧?  英文名:Mycoplasma-OffTM

  品牌:德國MB用途:實驗環境(如實驗臺、超凈臺、培養箱、儀器設備)、無菌車間和潔凈生產線的支原體的祛除,對清除支原體、細菌、真菌(含真菌孢子)和多種病毒污染均有效。

  2. 用法:噴霧劑噴灑待消毒的表面,等待5-10min后,用干凈紙巾擦拭。通風2-3分鐘。


  MB支原體祛除濕巾?  英文名:Mycoplasma-OffTM Wipes

  品牌:德國MB1. 用途:應用于電子設備、門把手、電話、移液器表面的支原體的祛除,對支原體、細菌、真菌(含真菌孢子)和多種病毒均有效。

  用法:用濕巾擦拭后,應讓被消毒物體的表面保持濕潤,再讓其自然風干。


  三、培養箱水槽、水浴鍋中支原體的預防

 支原體祛除劑(水槽用)?  英文名:Water ShieldTM

  品牌:德國MB

   1. 用途:預防培養箱水槽、水浴鍋的支原體、細菌和真菌污染。

  2. 用法:

  步驟1. 本品按1:200比例加入到蒸餾水中,如1L蒸餾水+5ml Water ShieldTM

  步驟2. 加入Water ShieldTM的蒸餾水可直接加入到培養箱水槽或水浴鍋中,

  步驟3. 4周左右清洗水槽,換水,重新加入Water ShieldTM。


  需要了解更多產品詳情或工作原理,可登錄北京締一生物官網查詢,或聯系本文發布作者。


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