qPCR(實時熒光定量PCR)和普通PCR那個靈敏度高

qPCR和普通PCR那個靈敏度高

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發(fā)表時間:2024-07-12 16:04

qPCR(實時熒光定量PCR)和普通PCR在靈敏度方面存在顯著差異,qPCR的靈敏度通常更高。

qPCR的靈敏度優(yōu)勢

檢測原理:qPCR在傳統(tǒng)PCR的基礎(chǔ)上加入了熒光信號,實現(xiàn)了對PCR擴增過程的實時監(jiān)測。這種實時監(jiān)測不僅繼承了傳統(tǒng)PCR高靈敏度和操作簡便的特點,而且通過熒光信號的檢測,進一步提高了對樣本的定量檢測能力。

檢測限:qPCR顯著降低了系統(tǒng)的檢測最低限,使其靈敏度比普通PCR高出1-2個數(shù)量級。這意味著qPCR能夠檢測到更低濃度的目標(biāo)DNARNA

探針技術(shù):qPCR中使用的熒光探針(如TaqMan探針、分子信標(biāo)、MGB探針等)進一步提高了檢測的特異性和靈敏度。這些探針通過特定的熒光基團和淬滅基團設(shè)計,在探針與目標(biāo)序列雜交時產(chǎn)生熒光信號,從而實現(xiàn)對目標(biāo)序列的精確檢測。

普通PCR的靈敏度

檢測原理:普通PCR通過DNA聚合酶催化引物與模板DNA的特異性結(jié)合,并進行多次循環(huán)的擴增反應(yīng),最終產(chǎn)生大量的目標(biāo)DNA片段。然而,普通PCR的檢測通常依賴于后續(xù)的電泳分析或其他檢測方法,這在一定程度上限制了其靈敏度。

檢測限:普通PCR的檢測靈敏度相對較低,通常難以檢測到極低濃度的目標(biāo)DNARNA。此外,普通PCR還容易受到非特異性擴增和污染的影響,進一步降低了其靈敏度。

結(jié)論

綜上所述,qPCR在靈敏度方面明顯優(yōu)于普通PCRqPCR通過實時監(jiān)測和熒光探針技術(shù),能夠檢測到更低濃度的目標(biāo)DNARNA,并且具有更高的特異性和準(zhǔn)確性。因此,在需要高靈敏度檢測的場合(如病原體檢測、基因表達分析等),qPCR是更為合適的選擇。

需要注意的是,雖然qPCR的靈敏度更高,但其操作也更為復(fù)雜和昂貴。因此,在選擇檢測方法時需要根據(jù)具體實驗需求和條件進行綜合考慮。


qPCR Kit  (經(jīng)典法).jpg


德國MB公司生產(chǎn)的支原體qPCR檢測試劑盒(均為探針法檢測),依據(jù)操作步驟的細微差別, 分『經(jīng)典法』和『一步法』兩種。   

此兩類試劑盒較全球其他廠家同類產(chǎn)品,具有以下獨特的優(yōu)點:

①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性,一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體),根據(jù)序列一致性,至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單,易于觀察(使用MB的試劑盒,下表中列出的支原體物種均為陽性,其他微生物或真核細胞均為陰性,無交叉反應(yīng))。


③高靈敏度,MB公司的支原體qPCR檢測試劑盒經(jīng)典法最低檢測限可達到≤10CFU/ml。

MB公司的支原體qPCR檢測試劑盒一步法最低檢測限≥50個基因組/反應(yīng)。

④MB公司有相應(yīng)配套的10CFU/100CFU的敏感度測試的標(biāo)準(zhǔn)品,便于方法學(xué)驗證。

MB公司有相應(yīng)配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA,便于特異性驗證。

MB公司有相應(yīng)配套的支原體絕對定量標(biāo)準(zhǔn)品,便于最后定量檢測。



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