細胞系的交叉污染可能是毀掉你實驗的元兇

　　在任何實驗室中使用多種細胞系都會導致一種細胞系被另一種細胞系污染的可能性。培養物的交叉污染困擾著許多研究人員，經常導致錯誤的結果、結果的撤回、掩蓋以及在無意中使用錯誤的細胞后數據和結果的一些徹頭徹尾的“偽造”。

1960年代和1970年代科研工作者初步意識到這不是一個微不足道的問題，當時觀察到許多細胞系已被**個建立的人類細胞系HeLa細胞交叉污染。這種情況已經發生到一定程度，以至于許多細胞系，如KB、Hep-2和INT407被交叉污染，以至于不清楚原始細胞系是否還存在或已被HeLa完全取代?！　?/span>

　　1967年，Gartler使用同工酶分析報告稱，20個人類細胞系已被HeLa細胞污染。Nelson-Rees及其同事系統地研究了大量細胞系，并證明HeLa對細胞系的廣泛污染已經發生。1977年，該小組證明在檢查的253 種培養物中，發現21 種屬于錯誤物種，15 種被HeLa污染 。另一項調查 246 種培養物的當代研究表明，14%的培養物被其他物種污染，而25%的污染來自Hela。1984年，Hukku的一項研究表明情況沒有改善，對該實驗室收到的275種培養物進行分析測試表明，36% 的培養物被交叉污染：其中25% 被其他物種的細胞交叉污染，11%被另一個人類細胞系污染。

　　在1999年由德國微生物和細胞培養物保藏中心(DSMZ)的研究人員發表的一項研究中，分析了252種細胞系表明在45(18%)個細胞系中存在交叉污染。最近的這份報告表明，盡管不斷發出危險警告，但對這個問題仍然存在(確定“我是誰”的檢測技術叫STR基因分型，已經是細胞鑒定界的金標準)。

　　大多數這種性質的交叉污染是組織培養技術不佳和同時培養多個細胞系導致的結果。除了細胞系的意外混合之外，對多個細胞系使用移液管或培養基瓶以及產生氣溶膠也會導致污染發生。與微生物污染一樣，對培養物的微觀監測很可能是交叉污染的**個跡象，觀察混合形態或生長速率的變化應該提醒培養者注意潛在的問題。

　　將交叉污染的可能性降到最低的一些建議：

　　1. 當新的細胞系被提取出來時，將原始組織、細胞或DNA的代表性樣本存檔，以便日后驗證。

　　2. 從權威認證的細胞庫獲取細胞系，而不是經常通過多個實驗室轉手傳代，獲得細胞。

　　3. 在實驗室之間轉移的細胞系應確認無支原體，并應隨細胞系附上證明其真實性的完整信息。

　　4. 迅速擴增新的細胞系來凍存。

　　5. 以懷疑的態度對待細胞形態和特征的變化。

　　6. 在生物安全柜中操作時，一次只能使用一種細胞系。此細胞系操作結束后，對機柜進行消毒，運行幾分鐘后再進行另一細胞系的操作。

　　7. 專門的瓶培養基用于單個細胞系。

　　8. 應將氣溶膠的形成控制在最低限度。

　　9. 培養3個月或10次傳代后，停止工作細胞系并從液氮儲存中獲得新的細胞庫存。

　　10. 所有培養瓶都應仔細正確地貼上標簽。