PCR的組成部分

PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶鏈式反應，是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點，通過變性、退火、延伸等步驟，體外復制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程。今天跟大家分享的是PCR的組成部分。

●脫氧模板DNA

用于復制的PCR模板可以是任何DNA來源，如基因組DNA（gDNA）、互補DNA（cDNA）和質粒DNA。DNA的組成或復雜度會影響PCR擴增的**起始量。

●脫氧核苷三磷酸（dNTP）

dNTP由四個基本核苷酸組成——dATP、dCTP、dGTP和dTTP——是新DNA鏈的組成元件。這四種核苷酸通常以相等摩爾量加入到PCR反應體系中，以實現**的堿基引入。在常見的PCR應用中，各種dNTP的常用終濃度通常為0.2mM。

●鎂離子（Mg2+）

鎂離子（Mg2+）作為DNA聚合酶活性的輔助因子，有助于聚合期間dNTP的結合。酶活性位點處的鎂離子可催化引物的3’-OH與dNTP的磷酸基團間形成磷酸二酯鍵。此外， Mg2+ 能夠穩定磷酸鹽骨架上的負電荷，從而促進引物與DNA模板形成復合物

●緩沖液

PCR緩沖液能夠為DNA聚合酶活性提供適宜的化學環境。緩沖液pH通常為8.0-9.5，一般使用Tris-HCl來調節。

● 引物

PCR引物是含有15-30個堿基的合成DNA寡核苷酸。能夠與模板DNA中目標區域的側翼序列結合（通過序列互補）。在PCR反應期間，DNA聚合酶從 3′端開始延伸引物。因此，引物結合位點必須是靶標附近所特有的，并且與起始DNA的其它部分序列具有最小的同源性，以確保目的片段的特異性擴增。

● DNA聚合酶

它是以親代DNA為模板，催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA的一類酶。這些DNA聚合酶的共同特征為：①具有5’→3’聚合酶活性，這就決定了DNA只能沿著5’→3’方向合成；②需要引物，DNA聚合酶不能催化DNA新鏈從頭合成，只能催化dNTP加入核苷酸鏈的3'-OH末端。