PCR的組成部分

PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點(diǎn)，通過(guò)變性、退火、延伸等步驟，體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補(bǔ)的子鏈DNA的過(guò)程。今天跟大家分享的是PCR的組成部分。

●脫氧模板DNA

用于復(fù)制的PCR模板可以是任何DNA來(lái)源，如基因組DNA（gDNA）、互補(bǔ)DNA（cDNA）和質(zhì)粒DNA。DNA的組成或復(fù)雜度會(huì)影響PCR擴(kuò)增的**起始量。

●脫氧核苷三磷酸（dNTP）

dNTP由四個(gè)基本核苷酸組成——dATP、dCTP、dGTP和dTTP——是新DNA鏈的組成元件。這四種核苷酸通常以相等摩爾量加入到PCR反應(yīng)體系中，以實(shí)現(xiàn)**的堿基引入。在常見的PCR應(yīng)用中，各種dNTP的常用終濃度通常為0.2mM。

●鎂離子（Mg2+）

鎂離子（Mg2+）作為DNA聚合酶活性的輔助因子，有助于聚合期間dNTP的結(jié)合。酶活性位點(diǎn)處的鎂離子可催化引物的3’-OH與dNTP的磷酸基團(tuán)間形成磷酸二酯鍵。此外， Mg2+ 能夠穩(wěn)定磷酸鹽骨架上的負(fù)電荷，從而促進(jìn)引物與DNA模板形成復(fù)合物

●緩沖液

PCR緩沖液能夠?yàn)镈NA聚合酶活性提供適宜的化學(xué)環(huán)境。緩沖液pH通常為8.0-9.5，一般使用Tris-HCl來(lái)調(diào)節(jié)。

● 引物

PCR引物是含有15-30個(gè)堿基的合成DNA寡核苷酸。能夠與模板DNA中目標(biāo)區(qū)域的側(cè)翼序列結(jié)合（通過(guò)序列互補(bǔ)）。在PCR反應(yīng)期間，DNA聚合酶從 3′端開始延伸引物。因此，引物結(jié)合位點(diǎn)必須是靶標(biāo)附近所特有的，并且與起始DNA的其它部分序列具有最小的同源性，以確保目的片段的特異性擴(kuò)增。

● DNA聚合酶

它是以親代DNA為模板，催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA的一類酶。這些DNA聚合酶的共同特征為：①具有5’→3’聚合酶活性，這就決定了DNA只能沿著5’→3’方向合成；②需要引物，DNA聚合酶不能催化DNA新鏈從頭合成，只能催化dNTP加入核苷酸鏈的3'-OH末端。