胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的使用指南

胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中扮演著至關(guān)重要的角色，以下是詳細(xì)的使用指南：

一、儲(chǔ)存與解凍

儲(chǔ)存條件：胎牛血清應(yīng)儲(chǔ)存在-20℃以下的冷凍環(huán)境中，以保持其穩(wěn)定性和延長保質(zhì)期。

解凍方法：使用前，應(yīng)將血清提前放置到2~8℃的冰箱中過夜溶解，避免直接置于室溫或37℃水浴中快速解凍，以防止蛋白質(zhì)沉淀和血清質(zhì)量受損。

分裝與避免反復(fù)凍融：若一次使用量不大，可將血清分裝成小包裝后凍存，以減少反復(fù)凍融對(duì)血清質(zhì)量的影響。

二、選擇與驗(yàn)證

血清批次：不同批次或不同廠家的血清可能存在質(zhì)量差異，因此在使用前應(yīng)對(duì)所選血清進(jìn)行驗(yàn)證，確保其適合所培養(yǎng)的細(xì)胞類型。

細(xì)胞適應(yīng)性：可使用經(jīng)常培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)血清進(jìn)行驗(yàn)證，觀察其對(duì)細(xì)胞生長的促進(jìn)作用。

血清濃度：胎牛血清通常以2%~20%的比例添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，具體濃度需根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需求來確定。

三、使用注意事項(xiàng)

無菌操作：在添加血清到培養(yǎng)基中時(shí)，應(yīng)確保無菌操作，避免污染。

混合均勻：血清添加到培養(yǎng)基后，應(yīng)充分混合均勻，以確保細(xì)胞能夠均勻接觸到血清中的營養(yǎng)物質(zhì)。

避免加熱：血清在添加到培養(yǎng)基中后，應(yīng)避免加熱至37℃以上，以防止蛋白質(zhì)變性。

觀察與調(diào)整：在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，應(yīng)定期觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，并根據(jù)需要調(diào)整血清濃度或更換血清批次。

四、沉淀處理

沉淀原因：血清中的沉淀多為析出的纖維蛋白，也可能是血清中的其他成分在儲(chǔ)存或解凍過程中形成的。

沉淀處理：一般情況下，沉淀不會(huì)影響血清的質(zhì)量和使用效果。若沉淀量較多，可在400×g條件下離心3分鐘，取上清液使用。

五、滅活與過濾

滅活：雖然滅活可以消除血清中的補(bǔ)體成分，但滅活過程中會(huì)產(chǎn)生大量沉淀，對(duì)血清的營養(yǎng)物質(zhì)造成較大破壞，對(duì)細(xì)胞的生長不利。因此，一般情況下不建議對(duì)血清進(jìn)行滅活。

過濾：血清和添加了血清的培養(yǎng)基在使用時(shí)通常不需要過濾。然而，如果實(shí)驗(yàn)要求無菌條件，且血清批次存在污染風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，可以考慮使用0.22微米的濾器進(jìn)行過濾。

六、應(yīng)用場景與注意事項(xiàng)

應(yīng)用場景：胎牛血清適用于多種細(xì)胞類型的培養(yǎng)，包括原代細(xì)胞、干細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等。在特定研究中，如神經(jīng)細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)，高濃度胎牛血清可作為誘導(dǎo)因子促進(jìn)細(xì)胞分化。

注意事項(xiàng)：在更換使用不同品牌或批次的血清時(shí)，需提前對(duì)要使用的血清進(jìn)行驗(yàn)證。在更換使用時(shí)可以將要更換的血清和原本使用的血清1:1混合使用1~2代，待細(xì)胞完全適應(yīng)后進(jìn)行更換。

綜上所述，胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的使用需要遵循一定的指南和注意事項(xiàng)。正確的儲(chǔ)存、解凍、選擇與驗(yàn)證、使用注意事項(xiàng)以及沉淀處理都是確保細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。同時(shí)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求和細(xì)胞類型選擇合適的血清濃度和應(yīng)用場景也是至關(guān)重要的。也可以選擇現(xiàn)在大多數(shù)科研人都在用的Ausbian特級(jí)胎牛血清，精選內(nèi)毒素更低批次（≤3EU/ml），澳洲原裝進(jìn)口，是細(xì)胞典藏等重大項(xiàng)目十幾年的穩(wěn)定供應(yīng)品牌。