胎牛血清在細胞培養(yǎng)中的使用指南

胎牛血清在細胞培養(yǎng)中扮演著至關(guān)重要的角色，以下是詳細的使用指南：

一、儲存與解凍

儲存條件：胎牛血清應(yīng)儲存在-20℃以下的冷凍環(huán)境中，以保持其穩(wěn)定性和延長保質(zhì)期。

解凍方法：使用前，應(yīng)將血清提前放置到2~8℃的冰箱中過夜溶解，避免直接置于室溫或37℃水浴中快速解凍，以防止蛋白質(zhì)沉淀和血清質(zhì)量受損。

分裝與避免反復(fù)凍融：若一次使用量不大，可將血清分裝成小包裝后凍存，以減少反復(fù)凍融對血清質(zhì)量的影響。

二、選擇與驗證

血清批次：不同批次或不同廠家的血清可能存在質(zhì)量差異，因此在使用前應(yīng)對所選血清進行驗證，確保其適合所培養(yǎng)的細胞類型。

細胞適應(yīng)性：可使用經(jīng)常培養(yǎng)的細胞對血清進行驗證，觀察其對細胞生長的促進作用。

血清濃度：胎牛血清通常以2%~20%的比例添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，具體濃度需根據(jù)細胞類型和實驗需求來確定。

三、使用注意事項

無菌操作：在添加血清到培養(yǎng)基中時，應(yīng)確保無菌操作，避免污染。

混合均勻：血清添加到培養(yǎng)基后，應(yīng)充分混合均勻，以確保細胞能夠均勻接觸到血清中的營養(yǎng)物質(zhì)。

避免加熱：血清在添加到培養(yǎng)基中后，應(yīng)避免加熱至37℃以上，以防止蛋白質(zhì)變性。

觀察與調(diào)整：在細胞培養(yǎng)過程中，應(yīng)定期觀察細胞生長狀態(tài)，并根據(jù)需要調(diào)整血清濃度或更換血清批次。

四、沉淀處理

沉淀原因：血清中的沉淀多為析出的纖維蛋白，也可能是血清中的其他成分在儲存或解凍過程中形成的。

沉淀處理：一般情況下，沉淀不會影響血清的質(zhì)量和使用效果。若沉淀量較多，可在400×g條件下離心3分鐘，取上清液使用。

五、滅活與過濾

滅活：雖然滅活可以消除血清中的補體成分，但滅活過程中會產(chǎn)生大量沉淀，對血清的營養(yǎng)物質(zhì)造成較大破壞，對細胞的生長不利。因此，一般情況下不建議對血清進行滅活。

過濾：血清和添加了血清的培養(yǎng)基在使用時通常不需要過濾。然而，如果實驗要求無菌條件，且血清批次存在污染風(fēng)險時，可以考慮使用0.22微米的濾器進行過濾。

六、應(yīng)用場景與注意事項

應(yīng)用場景：胎牛血清適用于多種細胞類型的培養(yǎng)，包括原代細胞、干細胞、腫瘤細胞等。在特定研究中，如神經(jīng)細胞分化實驗，高濃度胎牛血清可作為誘導(dǎo)因子促進細胞分化。

注意事項：在更換使用不同品牌或批次的血清時，需提前對要使用的血清進行驗證。在更換使用時可以將要更換的血清和原本使用的血清1:1混合使用1~2代，待細胞完全適應(yīng)后進行更換。

綜上所述，胎牛血清在細胞培養(yǎng)中的使用需要遵循一定的指南和注意事項。正確的儲存、解凍、選擇與驗證、使用注意事項以及沉淀處理都是確保細胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。同時，根據(jù)實驗需求和細胞類型選擇合適的血清濃度和應(yīng)用場景也是至關(guān)重要的。也可以選擇現(xiàn)在大多數(shù)科研人都在用的Ausbian特級胎牛血清，精選內(nèi)毒素更低批次（≤3EU/ml），澳洲原裝進口，是細胞典藏等重大項目十幾年的穩(wěn)定供應(yīng)品牌。