qPCR檢測(cè)中出現(xiàn)“None”是哪些原因?qū)е碌?/h1>

qPCR檢測(cè)中出現(xiàn)none是哪些原因?qū)е碌?/h2>
 二維碼
發(fā)表時(shí)間：2024-10-28 17:04

qPCR（熒光定量PCR）檢測(cè)中出現(xiàn)“None”的情況，可能由多種原因?qū)е隆Ｒ韵率且恍┛赡艿脑蚣捌浣忉專?/span>

擴(kuò)增曲線異常：

如果擴(kuò)增曲線不正常，CT值可能顯示“Undetermined”，進(jìn)而在結(jié)果中表現(xiàn)為“None”。這可能是由于多種因素導(dǎo)致的擴(kuò)增失敗，如引物設(shè)計(jì)不合理、模板質(zhì)量差、反應(yīng)條件不適宜等。

熒光信號(hào)未采集：

在每個(gè)擴(kuò)增循環(huán)結(jié)束后，如果沒有設(shè)置熒光信號(hào)的收集步驟，那么儀器將無法檢測(cè)到熒光信號(hào)，從而在結(jié)果中顯示為“None”。

ROX參比染料問題：

ROX是一種在qPCR反應(yīng)中常用的參比染料，其熒光信號(hào)并不隨著PCR擴(kuò)增而增強(qiáng)。如果選用了不含ROX的預(yù)混液或者不希望使用ROX校正，但軟件仍然默認(rèn)檢測(cè)ROX并使用均一化數(shù)據(jù)，那么可能會(huì)導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，甚至在結(jié)果中顯示為“None”。此時(shí)，可以在分析設(shè)置中將參比熒光染料選項(xiàng)改為“None”，再重新分析。

系統(tǒng)界面參數(shù)設(shè)置錯(cuò)誤：

如果系統(tǒng)界面的參數(shù)設(shè)置錯(cuò)誤，如將無樣品的孔也設(shè)置了target和sample參與CT值計(jì)算，那么可能會(huì)導(dǎo)致CT值錯(cuò)誤或無法計(jì)算，從而在結(jié)果中顯示為“None”。此時(shí)，需要檢查并修改系統(tǒng)界面的參數(shù)設(shè)置。

耗材或儀器問題：

使用了透光性不好的PCR耗材或不配套的耗材，或者儀器本身存在問題，如需要校準(zhǔn)等，也可能導(dǎo)致熒光信號(hào)檢測(cè)不準(zhǔn)確或無法檢測(cè)，從而在結(jié)果中顯示為“None”。

模板濃度問題：

如果模板濃度過低，那么可能需要更多的循環(huán)數(shù)才能達(dá)到熒光閾值線，甚至可能無法達(dá)到。這可能導(dǎo)致CT值偏大或無法計(jì)算，從而在結(jié)果中顯示為“None”。此時(shí)，可以嘗試增加模板量或優(yōu)化模板提取過程。

綜上所述，QPCR檢測(cè)中出現(xiàn)“None”的原因可能涉及多個(gè)方面，包括擴(kuò)增曲線異常、熒光信號(hào)未采集、ROX參比染料問題、系統(tǒng)界面參數(shù)設(shè)置錯(cuò)誤、耗材或儀器問題以及模板濃度問題等。為了解決這個(gè)問題，需要仔細(xì)檢查實(shí)驗(yàn)步驟和條件，并逐一排查可能的原因。
相關(guān)閱讀
最新動(dòng)態(tài)