支原體污染細胞后的檢測方法

支原體污染細胞后的檢測方法有多種，以下是一些常用的檢測方法：

試劑盒檢測法：

使用專門用于支原體檢測的試劑盒，通過細胞滴片進行檢測。

此方法簡便快捷，是常用的初步篩選手段。

觀察細胞形態和生長特征：

在支原體污染較嚴重時，可觀察到細胞生長減慢，培養基pH變酸，并出現細胞病變。

但由于支原體污染引起的病變特征與病毒感染相似，因此不能作為**診斷依據。

分離培養法：

從可疑的細胞培養體系中取樣，并接種到最適宜支原體生長的瓊脂平板上。

觀察支原體在瓊脂平板上的生長情況，形成特征性菌落。

此方法準確度高，被認為是支原體檢測的金標準，但檢測時間長，至少需要4周時間。

DNA結合熒光素染色法：

利用熒光染劑（如bisbenzimide, Hoechst 33258）對細胞進行染色。

熒光染料會結合到支原體DNA的A-T豐富區域，使支原體DNA在細胞核外與細胞周圍呈現許多大小均一的熒光小點。

此方法快速直觀，但靈敏度較低，在支原體污染不嚴重時可能得到模棱兩可的結果。

PCR擴增檢測法：

使用支原體通用引物對可疑樣本進行PCR擴增。

通過凝膠電泳觀察特異性條帶的出現，以此指示支原體的存在。

此方法靈敏度高，檢測速度快，但可能產生假陽性結果，且不能區分支原體的死活。

電子顯微鏡和免疫電子顯微鏡法：

在電子顯微鏡或免疫電鏡下對樣本進行觀察。

此方法準確度高，但受條件限制，檢測時間長，敏感性不高。

酶學檢測法：

將可疑樣本添加到特定底物中，利用支原體的酶將ADP轉化為ATP，隨后利用能發光的luciferase酶指示支原體的存在。

此方法檢測速度快，但靈敏度較低，且需要的檢測儀器尚未普及。

此外，還有間接免疫熒光法和免疫印跡等方法，這些方法也具有簡便、快速、特異性強等特點。

在選擇檢測方法時，應根據實驗室條件、檢測時間要求、靈敏度需求等因素綜合考慮。同時，為了預防支原體污染，應嚴格控制實驗環境，規范實驗操作，確保細胞培養基和器材的無菌狀態。對于新引進的細胞系應進行檢測，防止引入外來的污染源。對于凍存的細胞，在凍存之前或放入液氮之前進行檢測，以免將含支原體的細胞作為種源保存。