支原體污染細(xì)胞后的檢測方法

支原體污染細(xì)胞后的檢測方法有多種，以下是一些常用的檢測方法：

試劑盒檢測法：

使用專門用于支原體檢測的試劑盒，通過細(xì)胞滴片進(jìn)行檢測。

此方法簡便快捷，是常用的初步篩選手段。

觀察細(xì)胞形態(tài)和生長特征：

在支原體污染較嚴(yán)重時，可觀察到細(xì)胞生長減慢，培養(yǎng)基pH變酸，并出現(xiàn)細(xì)胞病變。

但由于支原體污染引起的病變特征與病毒感染相似，因此不能作為**診斷依據(jù)。

分離培養(yǎng)法：

從可疑的細(xì)胞培養(yǎng)體系中取樣，并接種到最適宜支原體生長的瓊脂平板上。

觀察支原體在瓊脂平板上的生長情況，形成特征性菌落。

此方法準(zhǔn)確度高，被認(rèn)為是支原體檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，但檢測時間長，至少需要4周時間。

DNA結(jié)合熒光素染色法：

利用熒光染劑（如bisbenzimide, Hoechst 33258）對細(xì)胞進(jìn)行染色。

熒光染料會結(jié)合到支原體DNA的A-T豐富區(qū)域，使支原體DNA在細(xì)胞核外與細(xì)胞周圍呈現(xiàn)許多大小均一的熒光小點(diǎn)。

此方法快速直觀，但靈敏度較低，在支原體污染不嚴(yán)重時可能得到模棱兩可的結(jié)果。

PCR擴(kuò)增檢測法：

使用支原體通用引物對可疑樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

通過凝膠電泳觀察特異性條帶的出現(xiàn)，以此指示支原體的存在。

此方法靈敏度高，檢測速度快，但可能產(chǎn)生假陽性結(jié)果，且不能區(qū)分支原體的死活。

電子顯微鏡和免疫電子顯微鏡法：

在電子顯微鏡或免疫電鏡下對樣本進(jìn)行觀察。

此方法準(zhǔn)確度高，但受條件限制，檢測時間長，敏感性不高。

酶學(xué)檢測法：

將可疑樣本添加到特定底物中，利用支原體的酶將ADP轉(zhuǎn)化為ATP，隨后利用能發(fā)光的luciferase酶指示支原體的存在。

此方法檢測速度快，但靈敏度較低，且需要的檢測儀器尚未普及。

此外，還有間接免疫熒光法和免疫印跡等方法，這些方法也具有簡便、快速、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)。

在選擇檢測方法時，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件、檢測時間要求、靈敏度需求等因素綜合考慮。同時，為了預(yù)防支原體污染，應(yīng)嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)環(huán)境，規(guī)范實(shí)驗(yàn)操作，確保細(xì)胞培養(yǎng)基和器材的無菌狀態(tài)。對于新引進(jìn)的細(xì)胞系應(yīng)進(jìn)行檢測，防止引入外來的污染源。對于凍存的細(xì)胞，在凍存之前或放入液氮之前進(jìn)行檢測，以免將含支原體的細(xì)胞作為種源保存。