細胞培養中如何使用南美胎牛血清

在細胞培養中使用南美胎牛血清時，需要遵循一系列正確的操作步驟和注意事項，以確保細胞培養的成功率和細胞的健康狀態。以下是在細胞培養中使用南美胎牛血清的詳細步驟和注意事項：

一、儲存與解凍

儲存條件：南美胎牛血清應儲存在-20℃的冰箱中，以保持其生物活性。

避免反復凍融：如一次用不完，應進行分裝，以避免反復凍融導致因子活性降低。

解凍方法：使用前，將血清置于2~8℃冰箱過夜溶解，或置于室溫下緩慢解凍，不建議直接放到37℃水浴中快速解凍（升溫過快會導致血清中蛋白質大量沉淀，影響血清質量）。

二、配制與使用

配制比例：南美胎牛血清通常是以2%~20%的比例加到基礎培養基中，混合后配成完全培養基。最常用比例為10%，過多血清容易使培養中的細胞發生變化，特別是一些二倍體的無限細胞系，迅速生長之后容易發生惡性轉化。具體**濃度需要根據實驗來確定。

現用現配：血清和培養基應盡可能“現用現配”，配好的培養液應在一周內用完，以保持其新鮮度和有效性。

避免高溫靜置：血清避免在4℃或更高溫度靜置過久，否則會破壞血清中有效活性成分，影響血清品質。

沉淀處理：血清中的沉淀一般為析出的纖維蛋白，升溫至37℃時會溶解（不建議加熱血清）。若沉淀量較多，可在400×g離心3分鐘，取上清使用。

三、細胞培養操作

準備培養皿：將培養皿放入無菌工作臺中，準備好所需的培養液。

加入培養液：向培養皿中加入適量的培養液，注意避免產生氣泡。

加入血清：按照配制比例加入南美胎牛血清，注意不要加入過多以免影響細胞的生長。

加入細胞懸液：將細胞懸液加入培養皿中，輕輕晃動培養皿使細胞均勻分布。

培養：將培養皿放入培養箱中進行培養，根據細胞類型和實驗需求設置適當的培養條件。

四、注意事項

血清質量驗證：在使用南美胎牛血清之前，應提前驗證其對所培養的細胞生長的促進作用。可以使用自己經常培養的細胞進行驗證。

品牌與批次更換：在更換使用不同品牌或批次的血清之前，也需進行驗證。在更換使用時可以將要更換的血清和原本使用的血清1:1混合使用1~2代，待細胞完全適應后進行更換。

無菌操作：在整個細胞培養過程中，應嚴格遵守無菌操作規程，避免污染。

總之，在細胞培養中使用南美胎牛血清時，需要遵循正確的操作步驟和注意事項，以確保細胞培養的成功率和細胞的健康狀態。