怎么處理細胞培養支原體污染？

細胞培養過程中支原體污染是一個常見且棘手的問題。支原體是一種無細胞壁、大小僅為0.20.3um的原核生物，可透過一般過濾膜（0.220.45um），在細胞培養中容易隱匿傳播并造成污染。以下是對細胞培養支原體污染的處理方法：

一、識別污染

觀察細胞狀態：支原體污染通常表現為細胞生長緩慢、形態異常、培養基變渾濁等現象。

檢測手段：

PCR檢測：根據支原體基因組內的保守序列設計特異引物，對待檢樣品的核酸進行擴增，通過對擴增產物的大小分析作出診斷。PCR檢測技術用于支原體污染的檢測，具有周期短、靈敏度高、特異性好、操作簡單的優點，且一次可檢測大量樣品。

熒光顯微鏡觀察：使用熒光標記的DNA探針特異性結合支原體的DNA或RNA，然后在熒光顯微鏡下觀察。

培養檢測：將樣本接種到支原體專用培養基中，觀察是否有生長。

二、處理污染

隔離受污染的細胞：將受污染的細胞系從培養箱中移出，并妥善處理，避免污染擴散。

清理培養環境：徹底清洗培養箱、工作臺等實驗環境，使用70%的酒精或Mycoplasma Off?支原體祛除噴霧劑即用型，該支原體噴霧中中含有支原體專用殺除劑Mynox^?，可在幾分鐘內迅速殺除支原體。

消毒處理：

紫外線照射：利用紫外線對培養箱內部進行照射，破壞支原體的DNA結構，達到殺菌效果。

臭氧消毒：臭氧具有強氧化性，可以氧化分解支原體，達到消毒目的。

甲醛熏蒸：甲醛可以與支原體中的蛋白質發生反應，使其變性失活，但需要注意甲醛的殘留和毒性問題。

驗證消毒效果：消毒完成后，再次進行PCR檢測或培養檢測，確保支原體污染已被徹底消除。

三、挽救受污染的細胞（針對重要細胞）

對于珍貴的或不可再得的細胞系，可以嘗試以下方法進行挽救：

使用支原體清除劑ZellShield^?直接用于培養基的細胞支原體去除劑。除此之外，ZellShield?也用于保護細胞培養免受細菌、真菌、酵母和支原體等廣泛常見污染物的影響，。

清洗純化法：通過細胞營養馴化、優質細胞群的篩選、細胞清洗和反復離心洗滌等方法，利用離心力、細胞、微生物質量和懸液的浮力差達到清除支原體的目的。結合敏感抗生素的抑殺作用，可達到更好的效果。

藥物輔助加溫處理：先用藥物處理后，再將污染的組織培養物放在41℃培養18小時，可殺死支原體，但對細胞有不良影響。

四、預防再次污染

為了避免支原體污染的再次發生，需要采取以下預防措施：

嚴格無菌操作：在細胞培養過程中，嚴格遵守無菌操作規范，避免手部接觸細胞培養物。

定期清潔和消毒：定期對培養箱、工作臺等實驗設備進行清潔和消毒處理。

檢查試劑和培養基：使用前對試劑和培養基進行支原體檢測，確保無污染。

加強實驗室管理：建立完善的實驗室管理制度，規范實驗操作、物品管理、環境維護等方面的工作。

綜上所述，細胞培養支原體污染的處理需要嚴格的生物安全措施和細心的實驗操作。通過識別污染、處理污染以及采取預防措施，可以有效地避免支原體污染的擴散和復發。