病毒檢測Kit（RT-qPCR法）（新冠病毒推薦）介紹和操作步驟

來自德國MB公司的RNA病毒檢測試劑盒（RT-qPCR法）（英文名：ConviFlex?RT-Taq mix）用于定性檢測和分析RNA病毒和RNA分子，特別適合檢測新冠病毒等此類病毒。締一生物作為MB公司國內總代理，為大家介紹RNA病毒檢測（RT-qPCR法）試劑的操作步驟。

步驟1. 凍干粉ConviFlex?RT-Taq Mix，離心5秒鐘，然后加入260μl復溶緩沖液2×Rehydration Buffer，室溫靜置5分鐘后，渦旋并離心5秒鐘，分裝，待用或-18℃保存。

步驟2.   每個反應體系為20μl，其中反應mix為15μl。

（1）依據本次試驗樣本數，制備RT-qPCR的反應mix。

1個反應mix需要：

①ConviFlex? RT-Taq Mix（即上面復溶的預混液）10μl，

②引物（濃度0.1 - 0.5 μM）

③探針（濃度0.1 - 0.5 μM）

④PCR級水（使每管總體積為15μl）

注：引物和探針的推薦濃度范圍是0.1-0.5 μM。

通常，引物濃度過高，會增加引物錯配和非特異RT-PCR產物。然而，當RT-PCR程序運行時間較長或使用簡并引物時，則推薦引物濃度升高至1 μM。（注意：若使用簡并引物，同一RT-PCR分析中，引物之間應具有相同的熔解溫度）

（2）將反應mix渦旋并離心5秒鐘。

（3）每個PCR管中加入15μl反應mix和5μl樣本（抽提后的RNA），
或5μl RNA提取試劑盒中的洗脫緩沖液，作為陰性對照，或5μl PCR級水作為無模板對照，或5μl陽性對照。

（4）扣緊PCR管，然后短暫離心。

（5）將PCR管放置qPCR儀上，蓋好蓋。

步驟3. 在qPCR儀上設置反應程序，示例:   1 cycle   50 °C for 20 min

1 cycle   95 °C for 10 min

45 cycles 95 °C for 15 sec

60 °C for 1 min

    (以上程序僅依據廠家經驗，用戶可根據實際情況調整溫度和孵育時間)

步驟4. 啟動程序。

綜上所述，您是不是已經對RNA病毒檢測（RT-qPCR法）試劑的操作步驟，有所了解。了解更多Ausbian血清和Minerva微生物污染控制試劑，歡迎訪問締一生物官網：www.276mk.com。