如何祛除支原體？——一步法支原體檢測(cè)試劑盒

支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)室中常見(jiàn)污染之一，保守估計(jì)常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中有15–35%存在支原體污染，在某些國(guó)家感染率更高（有些甚至高達(dá)80%）。

什么是支原體？

屬于柔膜綱（包括支原體、無(wú)膽支原體、腺原體、蟲(chóng)原體、螺原體等物種）

• 微小、懸浮、自我復(fù)制的有機(jī)體

• 簡(jiǎn)單的原生質(zhì)無(wú)細(xì)胞壁（包裹著簡(jiǎn)單的膜）

• 通常依附在細(xì)胞膜表面

• 支原體的生物合成能力缺失，許多營(yíng)養(yǎng)成份依賴于他們的宿主

• 超過(guò)180個(gè)已知種類

• 95%的感染來(lái)自主要的6個(gè)物種(M.orale,M.arginii,M.fermentans, M.salivarum, M.hyorhinis and A.laidlawii ）

• 廣泛寄生于自然界中如人、哺乳動(dòng)物、爬行動(dòng)物、昆蟲(chóng)、植物

細(xì)胞支原體污染的后果？

支原體生長(zhǎng)緩慢，不會(huì)馬上使細(xì)胞致死，但會(huì)影響細(xì)胞內(nèi)的各種參數(shù)。   

某些支原體種類甚至能降低四唑鹽，引起四唑鹽分析結(jié)果異常，以致會(huì)掩蓋一些化合物的毒性影響，引起IC50值的變化。

那如何檢測(cè)出支原體呢？

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常規(guī)PCR Kit （一步法）

Venor?Gem OneStep

常規(guī)PCR法介紹

常規(guī)PCR法：是根據(jù)支原體核糖體16s-23s rRNA的特異保守序列設(shè)計(jì)引物，對(duì)待檢樣本DNA進(jìn)行擴(kuò)增，通過(guò)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的大小分析作出診斷。

優(yōu)點(diǎn)：①靈敏度高，特異性好。②時(shí)間短，2-3小時(shí)出結(jié)果。③符合歐洲藥典。④操作簡(jiǎn)單。

缺點(diǎn)：①對(duì)于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結(jié)果會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性（可用培養(yǎng)法做補(bǔ)充驗(yàn)證）。②不同廠家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大（由于引物及內(nèi)在設(shè)計(jì)不同），需謹(jǐn)慎選擇，盡量在專業(yè)人員推薦指導(dǎo)下使用。