細胞培養過程中出現支原體污染怎么處理

支原體在自然界廣泛存在，尤其可以寄生于人、哺乳動物、植物、昆蟲等物種。人的口腔、鼻腔、皮膚、呼吸道等均可攜帶支原體。對于細胞培養實驗室，支原體對細胞的污染風險不容忽視，這不僅因為常規的抗生素對支原體無效，而且因為污染早期也沒有顯著表現。一旦發生污染，支原體會影響細胞基因表達和營養代謝改變，嚴重干擾實驗結果（包括細胞轉染和病毒包被）。這時應怎么辦？有沒有一款細胞祛除支原體試劑能解決呢？

一般來說，出現污染的細胞應進行丟棄，因為它們可能成為實驗室內支原體污染的源頭，造成污染的擴散。但對于費力擴增的細胞（如已轉染，或經過體外刺激），有些人不愿意丟棄，這是可考慮使用支原體祛除劑。

目前，市場上有不少品牌的支原體祛除劑，但需要進行區分一下。因為原理不一樣。有的是符合抗生素成分，僅僅是抑制支原體的增殖。有的則對支原體確實有殺滅作用，這種祛除劑見效快。但需要注意，在使用時應將細胞團打散，使其變為單個細胞懸浮狀態，因為支原體可能藏在細胞間隙中，而祛除劑需要和支原體接觸，才能發揮支原體的殺除作用。同時要注意細胞濃度要進行調節。一般祛除劑對細胞密度都有一定要求，細胞數量不能太多。

祛除支原體試劑Zell Shield?用法

（1）在每次使用Zell Shield?之前，細胞傳代時，先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法”處理好細胞，再使用加了Zell Shield?的培養基養細胞，能達到更好的祛除支原體的效果（“懸浮沖洗法”的詳細步驟，見下文）。

（2）Zell Shield?常規為-18℃保存，建議使用前，先融化分裝，仍舊-18℃避光保存，使用時按需融化配置。避免反復凍融。

（3）Zell Shield?按1:100濃度可直接加入培養基。例如：500ml培養基中添加5ml Zell Shield?，50mL/瓶的Zell Shield?可供5L培養基使用。

傳至3-4代時，原先細胞中的支原體則基本上沒有了。

總之，細胞培養時，由于支原體污染沒有顯著癥狀，因此需要定期監測，可采用PCR方法進行檢測。同時，要注意周圍環境的清潔，避免支原體污染，可采用一些對支原體有效的噴霧劑和濕巾進行清潔。細胞培養箱也可使用專門的支原體祛除劑，否則溫度合適后，培養箱的用水中可容易滋生微生物和支原體。

防患于未然。一旦出現支原體污染也不要慌張，不重要的細胞可以扔掉。重要的細胞可以如上面所述采用支原體祛除劑進行清除。