德國Minerva Biolabs支原體qPCR檢測試劑盒操作步驟

德國Minerva Biolabs公司，通稱德國MB公司，Minerva Biolabs GmbH 公司是世界上較為出名的微生物污染控制公司，尤其是支原體和軍團菌的技術和產品，在全球科研行業上很受歡迎。有很多做細胞培養的同學都對德國MB公司的支原體污染檢測試劑盒感興趣，今天締一生物小編就跟大家分享一下MB支原體qPCR檢測試劑盒的操作步驟。

德國Minerva Biolabs支原體qPCR檢測試劑盒操作步驟

第1步：樣本處理

a.細胞培養上清

b. 生物藥或需遵循藥典的樣本

說明：

①樣品基質可能會影響檢測的靈敏度。收集和篩選更高的樣品量可提高測定靈敏度。

②細胞培養物樣本含豐富的DNA酶，在低溫下也能降解支原DNA，影響檢測靈敏度。

建議：樣本做DNA抽提處理，實現最高靈敏度。

推薦：德國MB公司生產的專用支原體DNA提取試劑盒

Venor? Gem Sample Preparation Kit

該DNA抽提試劑盒已經過廣泛驗證。

第2步：試劑制備

a.凍干粉溶解

b. 反應體系制備

b1) 樣品為細胞上清篩查——反應體系制備

b2) 樣品為生物藥——反應體系制備

第3步：啟動熒光定量PCR儀

第4步：結果判別

FAM通道：檢測支原體熒光信號。HEX通道：檢測內控對照熒光信號。

支原體DNA和內控DNA存在信號的競爭性抑制。

支原體DNA越多，FAM通道信號越高，檢測內控對照的HEX通道信號越低。

定量需基于Ct值和DNA標準曲線。

Ct＜40為陽性結果。Ct≥40為陰性結果。

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