細(xì)胞培養(yǎng)過程中細(xì)胞被支原體污染怎么辦？

支原體是目前已知一類能在無生命培養(yǎng)基上生長繁殖的最小的原核細(xì)胞微生物，分為兩個屬：一為支原體屬（Mycoplasma），有幾十個種；另一為脲原體屬（Ureaplasma），僅有一種。革蘭染色為陰性，但不易著色，一般用Giemsa染色，染成淡紫色。

支原體在自然界分布廣泛，無細(xì)胞壁，直徑為0.1-0.3μm，且形態(tài)易變，極易通過除菌過濾器。大部分支原體繁殖速度比細(xì)菌慢，適宜生長溫度為35℃，適合于偏堿條件下生存（pH7.6—8.0），對酸耐受性差，對75%乙醇、煤酚皂溶液敏感。對熱比較敏感在細(xì)胞培養(yǎng)過程中如果在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)破碎的細(xì)胞很多，需要頻繁換液才能維持傳代培養(yǎng)的時候，即應(yīng)懷疑支原體污染。細(xì)胞培養(yǎng)過程中遇到的支原體95%都來自于以下四種支原體：口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、萊氏無膽甾支原體，其中萊氏無膽甾支原體為牛源性。

支原體污染的嚴(yán)重性

（1）細(xì)胞外形可以沒有明顯的變化，支原體可以與細(xì)胞共存，污染后細(xì)胞液不會死亡，培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁；

（2）使用被支原體污染的細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)會嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，因?yàn)橹гw會抑制細(xì)胞生長；導(dǎo)致染色體畸變；細(xì)胞膜抗原性改變；細(xì)胞復(fù)蘇后存活率降低等。

（3）影響細(xì)胞的代謝和功能：培液中的精氨酸被支原體大量消耗，引起細(xì)胞蛋白質(zhì)、DNA、rRNA、mRNA的合成障礙；支原體活動使培液成分發(fā)生改變（如發(fā)酵型支原體降解糖類產(chǎn)生酸性物質(zhì)），影響細(xì)胞代謝。

（4）培養(yǎng)過程中細(xì)胞破碎較多，培養(yǎng)基pH變化明顯，需要頻繁更換新鮮培養(yǎng)基；

（5）細(xì)胞被支原體污染后會形成共生體系導(dǎo)致污染不斷擴(kuò)大。

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