提高PCR實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確靈敏，PCR性能穩(wěn)定的關(guān)鍵點(diǎn)

PCR（其中包含qPCR）是一種常用的分子生物學(xué)技術(shù)，作為一類基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

除了常見(jiàn)的基因表達(dá)分析這類理論研究中，需要用到PCR技術(shù)，在臨床檢測(cè)、藥物生產(chǎn)過(guò)程監(jiān)控等流程中，也會(huì)用到PCR技術(shù)。其中，用于細(xì)胞治療、疫苗生產(chǎn)等過(guò)程支原體檢測(cè)的，德國(guó)Minerva Biolabs支原體檢測(cè)試劑盒，也是基于qPCR的原理。

PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、靈敏性和穩(wěn)定性，很大程度上會(huì)影響后續(xù)其他實(shí)驗(yàn)。在生物藥項(xiàng)目申報(bào)等過(guò)程中，如果支原體檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差，將有可能導(dǎo)致項(xiàng)目申報(bào)的失敗。因此，保證PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、靈敏性和穩(wěn)定性十分重要。

清潔實(shí)驗(yàn)環(huán)境

PCR實(shí)驗(yàn)造成DNA大量合成，常常會(huì)給實(shí)驗(yàn)室?guī)?lái)核酸污染。由于核酸產(chǎn)物不能自動(dòng)降解，因此DNA污染會(huì)不斷積聚。

由于PCR本身的特點(diǎn)，少量污染的DNA或RNA分子也會(huì)被檢測(cè)出來(lái)，從而造成實(shí)驗(yàn)偏差。

傳統(tǒng)的紫外照射，僅對(duì)500bp以上長(zhǎng)片段有效，對(duì)短片段效果不大，因此，該方法對(duì)祛除DNA污染并不理想。那么問(wèn)題來(lái)了，該如何有效清除核酸污染？

使用德國(guó)Minerva Biolabs公司（簡(jiǎn)稱MB）的PCR污染即用型祛除劑PCR Clean?。

PCR Clean?祛除DNA污染即用型試劑有噴霧和濕巾兩種樣式，在1分鐘之內(nèi)即可有效地祛除核酸污染（對(duì)質(zhì)粒、基因組和DNA、RNA擴(kuò)增片段均有效），適合各種實(shí)驗(yàn)臺(tái)、操作區(qū)域、設(shè)備和實(shí)驗(yàn)耗材，高效迅速，使用方便。

一個(gè)設(shè)計(jì)良好的實(shí)驗(yàn)，應(yīng)有適當(dāng)?shù)膶?duì)照和重復(fù)，可以幫助減少實(shí)驗(yàn)變化，提高結(jié)果的準(zhǔn)確性。

并且要對(duì)反應(yīng)條件優(yōu)化:包括退火溫度、Mg2+濃度、延長(zhǎng)時(shí)間等反應(yīng)條件，可以提高PCR擴(kuò)增的特異性和效率。

因此，我們推薦使用商品化的試劑盒。以細(xì)胞質(zhì)量等項(xiàng)目中，需要用到的支原體檢測(cè)試劑盒為例：德國(guó)MB支原體qPCR檢測(cè)試劑盒，Venor?Gem qEP

1、有獨(dú)立包裝的內(nèi)控對(duì)照，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2、高特異性，一次檢測(cè)即可涵蓋所有常見(jiàn)易感染細(xì)胞的支原體物種（包括歐洲藥典規(guī)定的9種支原體）。與細(xì)菌和真核DNA無(wú)交叉反應(yīng)。

3、高靈敏度，最低檢測(cè)限可達(dá)到≤10CFU/ml。

4、相應(yīng)配套的支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA，便于特異性驗(yàn)證。

5、有相應(yīng)配套的支原體絕對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)品，便于最后定量檢測(cè)。

合適的樣品制備