細(xì)胞支原體污染預(yù)防和清除方法

從事細(xì)胞培養(yǎng)的同學(xué)都知道，支原體真的可以說是無處不在，預(yù)防支原體污染細(xì)胞和細(xì)胞支原體清除就是必修課了。今天小編跟大家分享一下細(xì)胞支原體污染預(yù)防和清除。

在細(xì)胞培養(yǎng)工作中，主要從以下幾個(gè)方面來預(yù)防支原體的污染：

1）控制環(huán)境污染

2）嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作

3）細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌

4）在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素

細(xì)胞支原體污染后，有必要清除細(xì)胞中的支原體，常用方法有：

1）對于非重要的細(xì)胞，如培養(yǎng)中的細(xì)胞、WCB的細(xì)胞等，將培養(yǎng)物與用過的培養(yǎng)基滅活后丟棄即可。對于較為重要的細(xì)胞，如來源珍貴或?qū)嶒?yàn)室中細(xì)胞保藏量較小等可以采用以下（2）-（8）的方法。

2）使用專業(yè)的細(xì)胞支原體清除劑，對于珍貴的細(xì)胞，可使用Minerva Biolabs的Mynox?或Mynox Gold?。Mynox?是市面上一款具有殺滅支原體作用的細(xì)胞支原體清除劑。它提取自枯草桿菌，可與支原體膜特異性結(jié)合，破壞膜通透性，導(dǎo)致支原體膨脹破裂而死。使用Mynox?一般在2-3個(gè)小時(shí)即可完成清除任務(wù)。

Mynox Gold?是Mynox?的升級版，它通過四個(gè)療程產(chǎn)生作用。每個(gè)療程即細(xì)胞傳一代。它除了包括Mynox?，也包含復(fù)合抗生素成分。以往別的品牌的支原體清除劑只是針對支原體的抗生素成分，但也容易產(chǎn)生耐藥。Mynox Gold?將Mynox?和抗生素結(jié)合，即結(jié)合了二者的優(yōu)點(diǎn)，又去除了二者的不足，因?yàn)橛械募?xì)胞對Mynox?的治療不太適應(yīng)，而Mynox Gold?要比Mynox?更加溫和，對細(xì)胞的毒性效應(yīng)極小，因而更適用于脆弱的不太好養(yǎng)的細(xì)胞。

3）用清洗純化法清除支原體污染的方法：細(xì)胞營養(yǎng)馴化→優(yōu)質(zhì)細(xì)胞群的篩選→細(xì)胞清洗→反復(fù)離心洗滌，其原理是利用離心力、細(xì)胞、微生物質(zhì)量和懸液的浮力差達(dá)到清除支原體的目的。由于支原體個(gè)體小且除發(fā)酵支原體外多為細(xì)胞外寄生,所以通過反復(fù)洗滌細(xì)胞和低速離心換液使其中潛在的支原體數(shù)量降低至極限. 如結(jié)合敏感抗生素的抑殺作用，可達(dá)到更好的效果。

4）藥物輔助加溫處理：先用藥物處理后，再將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時(shí)，可殺死支原體，但對細(xì)胞有不良影響。

5）使用支原體特異性血清：用5%的兔支原體免疫血清可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性，并且5個(gè)月后仍為陰性。

6）動物體內(nèi)接種除菌法：把受支原體污染的腫瘤細(xì)胞接種在同種動物皮下或腹腔中，借動物免疫系統(tǒng)消滅支原體，而腫瘤細(xì)胞卻能在體內(nèi)繼續(xù)生長，待一定時(shí)間后，從體內(nèi)取出細(xì)胞再進(jìn)行培養(yǎng)繁殖。

7）巨噬細(xì)胞吞噬法：從動物腹腔采取巨噬細(xì)胞，為排除其它細(xì)胞成分，可先進(jìn)行純化，然后再加入被支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)液中混合培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，為檢查支原體是否已被消除干凈，可利用支持物培養(yǎng)法驗(yàn)證，取出支持物逐日染色、鏡檢觀察，至支原體已被消除干凈為止。

8）使用支原體清除培養(yǎng)基，每2~3天更換1次新鮮培養(yǎng)液，換液時(shí)用無菌的平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞1~2次；期間如果細(xì)胞密度過大，請保持細(xì)胞密度適當(dāng)（貼壁細(xì)胞可能需要用胰酶消化），并更換新的培養(yǎng)器皿，3天之后，即可見明顯清除效果；處理15天后，可以用支原體檢測試劑盒進(jìn)行檢測，檢測支原體是否殺滅完全；如果仍有支原體殘留，可以考慮再處理6天；為避免細(xì)胞再次受到“支原體”的污染，以后每隔1個(gè)月進(jìn)行支原體的常規(guī)檢測，以保證沒有新的支原體污染。

PS：支原體污染時(shí)細(xì)胞表現(xiàn)為長得不好，也不死亡，同時(shí)，培養(yǎng)基又是清亮的，時(shí)間長達(dá)一周也沒有什么變化，這時(shí)基本上可以判斷出是支原體污染了。

以上就是細(xì)胞支原體污染預(yù)防和清除方法了，更多信息可訪問締一生物官網(wǎng)：www.276mk.com。