細胞支原體污染預防和清除方法

從事細胞培養的同學都知道，支原體真的可以說是無處不在，預防支原體污染細胞和細胞支原體清除就是必修課了。今天小編跟大家分享一下細胞支原體污染預防和清除。

在細胞培養工作中，主要從以下幾個方面來預防支原體的污染：

1）控制環境污染

2）嚴格實驗操作

3）細胞培養基和器材要保證無菌

4）在細胞培養基中加入適量的抗生素

細胞支原體污染后，有必要清除細胞中的支原體，常用方法有：

1）對于非重要的細胞，如培養中的細胞、WCB的細胞等，將培養物與用過的培養基滅活后丟棄即可。對于較為重要的細胞，如來源珍貴或實驗室中細胞保藏量較小等可以采用以下（2）-（8）的方法。

2）使用專業的細胞支原體清除劑，對于珍貴的細胞，可使用Minerva Biolabs的Mynox?或Mynox Gold?。Mynox?是市面上一款具有殺滅支原體作用的細胞支原體清除劑。它提取自枯草桿菌，可與支原體膜特異性結合，破壞膜通透性，導致支原體膨脹破裂而死。使用Mynox?一般在2-3個小時即可完成清除任務。

Mynox Gold?是Mynox?的升級版，它通過四個療程產生作用。每個療程即細胞傳一代。它除了包括Mynox?，也包含復合抗生素成分。以往別的品牌的支原體清除劑只是針對支原體的抗生素成分，但也容易產生耐藥。Mynox Gold?將Mynox?和抗生素結合，即結合了二者的優點，又去除了二者的不足，因為有的細胞對Mynox?的治療不太適應，而Mynox Gold?要比Mynox?更加溫和，對細胞的毒性效應極小，因而更適用于脆弱的不太好養的細胞。

3）用清洗純化法清除支原體污染的方法：細胞營養馴化→優質細胞群的篩選→細胞清洗→反復離心洗滌，其原理是利用離心力、細胞、微生物質量和懸液的浮力差達到清除支原體的目的。由于支原體個體小且除發酵支原體外多為細胞外寄生,所以通過反復洗滌細胞和低速離心換液使其中潛在的支原體數量降低至極限. 如結合敏感抗生素的抑殺作用，可達到更好的效果。

4）藥物輔助加溫處理：先用藥物處理后，再將污染的組織培養物放在41℃培養18小時，可殺死支原體，但對細胞有不良影響。

5）使用支原體特異性血清：用5%的兔支原體免疫血清可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長，故經抗血清處理后11天即轉為陰性，并且5個月后仍為陰性。

6）動物體內接種除菌法：把受支原體污染的腫瘤細胞接種在同種動物皮下或腹腔中，借動物免疫系統消滅支原體，而腫瘤細胞卻能在體內繼續生長，待一定時間后，從體內取出細胞再進行培養繁殖。

7）巨噬細胞吞噬法：從動物腹腔采取巨噬細胞，為排除其它細胞成分，可先進行純化，然后再加入被支原體污染的細胞培養液中混合培養。在培養過程中，為檢查支原體是否已被消除干凈，可利用支持物培養法驗證，取出支持物逐日染色、鏡檢觀察，至支原體已被消除干凈為止。

8）使用支原體清除培養基，每2~3天更換1次新鮮培養液，換液時用無菌的平衡鹽溶液洗滌細胞1~2次；期間如果細胞密度過大，請保持細胞密度適當（貼壁細胞可能需要用胰酶消化），并更換新的培養器皿，3天之后，即可見明顯清除效果；處理15天后，可以用支原體檢測試劑盒進行檢測，檢測支原體是否殺滅完全；如果仍有支原體殘留，可以考慮再處理6天；為避免細胞再次受到“支原體”的污染，以后每隔1個月進行支原體的常規檢測，以保證沒有新的支原體污染。

PS：支原體污染時細胞表現為長得不好，也不死亡，同時，培養基又是清亮的，時間長達一周也沒有什么變化，這時基本上可以判斷出是支原體污染了。

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