支原體DNA抽提Kit試劑盒說明及操作步驟

支原體DNA抽提Kit試劑盒是來的德國Minerva-Biolabs產(chǎn)品，主要用途是從細(xì)胞培養(yǎng)物和生物藥中提取支原體DNA，和支原體檢測試劑盒配套使用。支原體DNA 提取試劑盒和支原體檢測試劑盒可配和使用，對支原體檢測能具有出色的靈敏度和高超的效率。適用于廣泛的樣本類型，產(chǎn)品遵循《歐洲藥典》的檢測標(biāo)準(zhǔn)。本文詳細(xì)介紹支原體DNA抽提Kit試劑盒說明及操作步驟。

支原體DNA抽提Kit試劑盒原理：

方法很簡單，由四步組成：

1）細(xì)胞裂解，

2）DNA 吸附到核酸純化柱上，

3）去除殘留污染物和抑制劑，

4）DNA 洗脫。

此方法無須酚/氯仿抽提，只需30 分鐘即可完成制備，提供PCR 所需的DNA。

支原體DNA抽提Kit試劑盒操作流程——詳細(xì)步驟：

? **次使用前，向緩沖液A1 和緩沖液A2 加入無水乙醇。

? 將恒溫儀設(shè)置到70℃。使緩沖液 E 加熱到70℃。

? 向1.5ml 新EP 管中加入最多200μ

1、細(xì)胞培養(yǎng)物。

對于即將上市產(chǎn)品的檢測：向樣品中最多加入50μl 內(nèi)控DNA 對照。例如，使用Venor?GeM Classic Kit 時(shí)，向每個(gè)樣品加入30μl 內(nèi)控DNA；使用Venor?GeM qEP Kit 時(shí)，向每個(gè)樣品加入12μl 內(nèi)控DNA。

2、加入200μl 調(diào)節(jié)液，渦旋振蕩至少10 秒鐘，在70℃孵育 10 分鐘。我們推薦使用恒溫震蕩

器，對樣品進(jìn)行持續(xù)晃動。或者在孵育過程中，對樣品進(jìn)行渦旋振蕩3~4 次。室溫下靜置2分鐘，再進(jìn)入到第3 步。

可選：如果蛋白含量＞10mg/ml，每個(gè)樣品加入10μl 蛋白酶K。簡單渦旋振蕩，并按上述描述進(jìn)行孵育。

3、樣本離心，向裂解物中加入400μl 吸附緩沖液，立即渦旋振蕩，充分混勻，防止核酸出現(xiàn)沉淀。不要離心樣本，立即進(jìn)入下一步。

4、用移液器將裂解物吸到收集管中的核酸純化柱中，不要將柱子的邊緣弄濕。

5、將核酸純化柱離心≥10000 ×g，1 分鐘。棄掉收集管中的液體。重新將核酸純化柱插到收集管中。

6、加入500μl 緩沖液A1。離心核酸純化柱≥10000 ×g，1 分鐘。棄掉收集管中的液體。重新將核酸純化柱插到收集管中。

7、加入500μl 緩沖液A2。離心核酸純化柱≥10000 ×g，1 分鐘。棄掉收集管中的液體。重新將核酸純化柱插到收集管中。可選：用緩沖液A2 再重復(fù)一次沖洗步驟。

8、**速度離心3 分鐘，以去除殘留的緩沖液A2。

9、棄掉收集管。將核酸純化柱插入到一個(gè)新的1.5ml EP 管中。

10、吸取60μl 已預(yù)熱的緩沖液E（70℃），直接加到核酸純化柱硅膠膜的中心。硅膠膜表面應(yīng)全部覆蓋上緩沖液E。

11、室溫孵育2 分鐘，然后離心8000×g，2 分鐘。

12、洗脫液中即包含DNA，可直接用于PCR。也可在2~8℃保存 1 周。更長期保存應(yīng)在-18℃以下。

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