細(xì)胞支原體清除劑Mynox? Gold產(chǎn)品成分和操作步驟

細(xì)胞培養(yǎng)物被支原體污染是經(jīng)常發(fā)生的。在細(xì)胞培養(yǎng)物中消除、滅活或抑制支原體常用的方法是用抗生素處理。單靠抗生素處理不能長(zhǎng)久地消除支原體，抗生素的細(xì)胞毒性可在真核細(xì)胞中引起不良反應(yīng)，并可能促進(jìn)耐藥支原體菌株的發(fā)展。因此推薦使用，針對(duì)支原體起作用的德國(guó)MB細(xì)胞支原體清除試劑Mynox?   Gold。本篇文章就來(lái)詳細(xì)說(shuō)說(shuō)細(xì)胞支原體清除劑Mynox? Gold產(chǎn)品成分熱點(diǎn)和操作步驟。

產(chǎn)品名稱：珍貴細(xì)胞株 清除支原體試劑

英文：Mynox? Gold Mycoplasma Elimination Reagent

品牌：Minerva-Biolabs?   

貨號(hào)：10-0201

規(guī)格：2套/盒

Mynox? Gold代表了經(jīng)典Mynox?試劑的進(jìn)一步發(fā)展，將抗生素和生物試劑與生物物理作用模式相結(jié)合，從而盡可能殺滅細(xì)胞中的支原體。

與其他細(xì)菌細(xì)胞相比，支原體沒(méi)有細(xì)胞壁，但被質(zhì)膜包圍。Mynox? Gold中含有的生物試劑可整合到支原體膜中，并損害其完整性。由于這種聯(lián)合配方，生物試劑和抗生素的有效劑量可以降低到最低的細(xì)胞毒性，同時(shí)仍然可靠和明確地消除支原體。

該試劑的生物物理作用模式將耐藥菌株的發(fā)展風(fēng)險(xiǎn)降至可忽略不計(jì)的水平。

Mynox? Gold使用方法

Mynox? Gold的一次應(yīng)用包括4個(gè)小瓶：1個(gè)『治療液』和2個(gè)『鞏固液』，每種成分都是無(wú)菌的即用型溶液。『治療液』破壞大部分支原體顆粒，而『鞏固液』不可逆轉(zhuǎn)地破壞所有剩余顆粒，將支原體從處理過(guò)的細(xì)胞培養(yǎng)物中消除。兩種處理方法對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞都是無(wú)害的。

以下方法步驟是為需要標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基的典型細(xì)胞培養(yǎng)而設(shè)計(jì)的，可用于貼壁和懸浮細(xì)胞系，個(gè)別情況下可能需要對(duì)這些程序進(jìn)行修改和優(yōu)化。

一、『治療液』混合物的制備

1.將4.5 ml含5% v/v FCS的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)基移入15ml無(wú)菌錐形離心管中，并加入500μl Mynox?Gold Starter Treatment(橙紅色蓋的小瓶)。

2.旋渦Mynox? Gold/培養(yǎng)基混合物。

3.將Mynox? Gold培養(yǎng)基混合物(5ml)轉(zhuǎn)移到無(wú)菌25平方厘米細(xì)胞培養(yǎng)瓶或無(wú)菌6cm培養(yǎng)皿中。

二、制備細(xì)胞

1.像往常一樣傳代細(xì)胞，用胰蛋白酶分離細(xì)胞團(tuán)，獲得單個(gè)細(xì)胞。

2.將含有5% (v/v) FCS的5ml細(xì)胞培養(yǎng)基中的10^4 - 10^5個(gè)單細(xì)胞轉(zhuǎn)移到Mynox?Gold培養(yǎng)基混合物中。處理混合物的總?cè)莘e為10 ml，最終FCS濃度為5% (v/v)。

3.輕輕地前后左右搖動(dòng)燒瓶或培養(yǎng)皿，以避免細(xì)胞分布不均勻。像往常一樣孵育細(xì)胞，然后進(jìn)行Mynox? Gold鞏固處理。

三、鞏固處理

1.培養(yǎng)細(xì)胞至80 - 90%的融合度。

2.以常規(guī)方式傳代。向含新鮮培養(yǎng)基的9.5 ml傳代細(xì)胞中，加入500μl Mynox?Gold『鞏固液』試劑(白色透明帽的小瓶)。調(diào)整FCS濃度。不再需要添加5% (v/v)的FCS。

3.重復(fù)Mynox? Gold鞏固處理2次以上。在第3次治療后(從起始處理開始共4代)，支原體消除程序完成。

四、支原體檢測(cè)

1.Mynox? gold處理的細(xì)胞培養(yǎng)物和病毒庫(kù)需要在不含支原體抗生素的情況下再培養(yǎng)4代，然后才能檢測(cè)支原體是否再次出現(xiàn)。對(duì)于高靈敏度的支原體污染檢測(cè)，我們推薦使用基于PCR的Venor?GeM支原體檢測(cè)試劑盒

2.定期重復(fù)PCR支原體檢測(cè)試驗(yàn)，以確保維持無(wú)支原體的細(xì)胞培養(yǎng)。