細胞支原體清除劑Mynox? Gold產(chǎn)品成分和操作步驟

細胞培養(yǎng)物被支原體污染是經(jīng)常發(fā)生的。在細胞培養(yǎng)物中消除、滅活或抑制支原體常用的方法是用抗生素處理。單靠抗生素處理不能長久地消除支原體，抗生素的細胞毒性可在真核細胞中引起不良反應，并可能促進耐藥支原體菌株的發(fā)展。因此推薦使用，針對支原體起作用的德國MB細胞支原體清除試劑Mynox?   Gold。本篇文章就來詳細說說細胞支原體清除劑Mynox? Gold產(chǎn)品成分熱點和操作步驟。

產(chǎn)品名稱：珍貴細胞株 清除支原體試劑

英文：Mynox? Gold Mycoplasma Elimination Reagent

品牌：Minerva-Biolabs?   

貨號：10-0201

規(guī)格：2套/盒

Mynox? Gold代表了經(jīng)典Mynox?試劑的進一步發(fā)展，將抗生素和生物試劑與生物物理作用模式相結合，從而盡可能殺滅細胞中的支原體。

與其他細菌細胞相比，支原體沒有細胞壁，但被質膜包圍。Mynox? Gold中含有的生物試劑可整合到支原體膜中，并損害其完整性。由于這種聯(lián)合配方，生物試劑和抗生素的有效劑量可以降低到最低的細胞毒性，同時仍然可靠和明確地消除支原體。

該試劑的生物物理作用模式將耐藥菌株的發(fā)展風險降至可忽略不計的水平。

Mynox? Gold使用方法

Mynox? Gold的一次應用包括4個小瓶：1個『治療液』和2個『鞏固液』，每種成分都是無菌的即用型溶液。『治療液』破壞大部分支原體顆粒，而『鞏固液』不可逆轉地破壞所有剩余顆粒，將支原體從處理過的細胞培養(yǎng)物中消除。兩種處理方法對培養(yǎng)的細胞都是無害的。

以下方法步驟是為需要標準培養(yǎng)基的典型細胞培養(yǎng)而設計的，可用于貼壁和懸浮細胞系，個別情況下可能需要對這些程序進行修改和優(yōu)化。

一、『治療液』混合物的制備

1.將4.5 ml含5% v/v FCS的標準細胞培養(yǎng)基移入15ml無菌錐形離心管中，并加入500μl Mynox?Gold Starter Treatment(橙紅色蓋的小瓶)。

2.旋渦Mynox? Gold/培養(yǎng)基混合物。

3.將Mynox? Gold培養(yǎng)基混合物(5ml)轉移到無菌25平方厘米細胞培養(yǎng)瓶或無菌6cm培養(yǎng)皿中。

二、制備細胞

1.像往常一樣傳代細胞，用胰蛋白酶分離細胞團，獲得單個細胞。

2.將含有5% (v/v) FCS的5ml細胞培養(yǎng)基中的10^4 - 10^5個單細胞轉移到Mynox?Gold培養(yǎng)基混合物中。處理混合物的總容積為10 ml，最終FCS濃度為5% (v/v)。

3.輕輕地前后左右搖動燒瓶或培養(yǎng)皿，以避免細胞分布不均勻。像往常一樣孵育細胞，然后進行Mynox? Gold鞏固處理。

三、鞏固處理

1.培養(yǎng)細胞至80 - 90%的融合度。

2.以常規(guī)方式傳代。向含新鮮培養(yǎng)基的9.5 ml傳代細胞中，加入500μl Mynox?Gold『鞏固液』試劑(白色透明帽的小瓶)。調整FCS濃度。不再需要添加5% (v/v)的FCS。

3.重復Mynox? Gold鞏固處理2次以上。在第3次治療后(從起始處理開始共4代)，支原體消除程序完成。

四、支原體檢測

1.Mynox? gold處理的細胞培養(yǎng)物和病毒庫需要在不含支原體抗生素的情況下再培養(yǎng)4代，然后才能檢測支原體是否再次出現(xiàn)。對于高靈敏度的支原體污染檢測，我們推薦使用基于PCR的Venor?GeM支原體檢測試劑盒

2.定期重復PCR支原體檢測試驗，以確保維持無支原體的細胞培養(yǎng)。