實驗室細(xì)胞污染之細(xì)菌污染

細(xì)胞污染是生物實驗室中常見的問題之一，輕則引起細(xì)胞狀態(tài)改變，降低實驗結(jié)果的可重復(fù)性，重則會直接導(dǎo)致細(xì)胞的死亡，影響實驗進(jìn)度，本篇文章就跟大家分享細(xì)胞污染之細(xì)菌污染。

細(xì)菌是一種原核細(xì)胞微生物，一般為微米級別。細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的污染菌為大腸桿菌、葡萄球菌、假單胞菌等。

細(xì)胞發(fā)生細(xì)菌污染后，有哪些癥狀？與其他污染相比，細(xì)菌污染在細(xì)胞培養(yǎng)過程中“發(fā)病”更為迅速，較容易被發(fā)現(xiàn)。具體表現(xiàn)為：

細(xì)胞培養(yǎng)基短期內(nèi)變黃且渾濁（大量酸性物質(zhì)累積）；

靜置的培養(yǎng)液時不渾濁，但稍加震蕩，就有許多渾濁物漂起；

可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒物漂浮；

細(xì)胞停止生長并有中毒表現(xiàn)，后出現(xiàn)大量死亡；

如何用實驗來驗證，細(xì)胞是否被細(xì)菌污染？常見的染色法、培養(yǎng)法以及PCR方法都可以對細(xì)菌污染進(jìn)行檢測。

如果只需要初步判定細(xì)胞是否被污染，課選擇涂片染色或培養(yǎng)法對樣品進(jìn)行檢測。

例如：革蘭氏染色法會使陽性菌呈現(xiàn)紫色，陰性菌呈現(xiàn)紅色；向肉湯培養(yǎng)基內(nèi)滴入少量培養(yǎng)液，37 ℃培養(yǎng)，培養(yǎng)基變渾濁；專業(yè)的PCR檢測：以Minerva Biolabs公司的細(xì)菌PCR檢測試劑盒（Onar? Bacteria Detection Kit，貨號：12-1025）為例：

該試劑盒采用PCR方法，用于檢測生物樣品（包括細(xì)胞培養(yǎng)物和病毒貯存液）中是否存在細(xì)菌。根據(jù)序列分析，該試劑盒可檢測超過45種細(xì)菌屬，其中含污染細(xì)胞的常見菌屬：

如果細(xì)胞不幸遭遇到了細(xì)菌污染的侵襲，該如何應(yīng)對呢？對于常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)物而言，發(fā)生細(xì)菌污染，建議直接將培養(yǎng)物丟棄，并對環(huán)境進(jìn)行消殺，紫外線滅菌、消毒液擦拭培養(yǎng)箱、工作臺等。

對于重要且污染相對較輕的細(xì)胞：一般用抗生素的常用量的 5~10 倍作沖擊療法，用藥 24~48 小時后再換常規(guī)培養(yǎng)液，但需要需要注意的是：一旦發(fā)生污染后再使用抗生素常常難以根除，有的抗生素只有抑菌作用而無殺菌效應(yīng)。且有研究表明，大量使用抗生素，或?qū)?xì)胞基因組產(chǎn)生影響。

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