貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)之胰酶消化法

傳代細(xì)胞，可根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的方法進(jìn)行細(xì)胞傳代。貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代，部分貼壁的細(xì)胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代。懸浮細(xì)胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進(jìn)行傳代，或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進(jìn)行傳代。今天要跟大家分享的是貼壁細(xì)胞傳代如何使用胰酶。

一般使用trypsin-EDTA濃度為0.25% ，消化液濃度過高時(shí)，易造成培養(yǎng)基中細(xì)胞碎片增多，黑渣子增多，常規(guī)細(xì)胞傳代時(shí)建議用0.05%的胰酶進(jìn)行消化，對(duì)于難消化的細(xì)胞可采用0.25%胰酶進(jìn)行消化，細(xì)胞密度過高超過80%時(shí)，采用分步消化法。胰酶儲(chǔ)存在-20°C，解凍在4°C進(jìn)行，**次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中，保存于-20°C，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin之活性降低，并可減少污染之機(jī)會(huì)。

需要注意的是：

1.傳代培養(yǎng)時(shí)注意無菌操作并防止細(xì)胞間的交叉污染。所有操作盡量靠近酒精燈火焰。每次**只進(jìn)行一種細(xì)胞的操作。每種細(xì)胞使用一套器材。

2.每天觀察細(xì)胞形態(tài)，掌握好細(xì)胞是否健康的標(biāo)準(zhǔn):健康細(xì)胞的形態(tài)飽滿，折光性好，生長致密時(shí)即可傳代。

3.如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染跡象，應(yīng)立即采取措施，一般應(yīng)棄置污染的細(xì)胞，如果必須挽救，可添加zellshield細(xì)胞支原體祛除劑，zellshield為無菌溶液，可直接加入培養(yǎng)基使用。

細(xì)胞祛除支原體試劑Zell Shield使用方法：

（1）在每次使用Zell Shield之前，細(xì)胞傳代時(shí)，先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法”處理好細(xì)胞，再使用加了Zell Shield的培養(yǎng)基養(yǎng)細(xì)胞，能達(dá)到更好的祛除支原體的效果。

（2）Zell Shield常規(guī)為-18℃保存，建議使用前，先融化分裝，仍舊-18℃避光保存，使用時(shí)按需融化配制。避免反復(fù)凍融。

（3）Zell Shield按1:100濃度可直接加入培養(yǎng)基。例如：500ml培養(yǎng)基中添加5ml Zell Shield，50mL/瓶的Zell Shield可供5L培養(yǎng)基使用。