細胞培養之懸浮細胞不貼壁的原因和解決辦法

養細胞的小伙伴經常會苦惱為何辛苦呵護的細胞，怎么也不愿意貼壁，細胞貼壁了又很容易成塊或者成團掉下來，或者原本貼壁的細胞，復蘇后細胞不貼壁了，真的很令人抓狂，今天小編就跟大家分享懸浮細胞不貼壁的原因和解決辦法。

（1）細胞的傳代重要的是胰酶處理時間：消化不夠細胞本身就是成團的；若胰酶處理太久，容易造成細胞膜蛋白損傷，使細胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強，嚴重的時候甚至會造成細胞死亡。

解決辦法：1、縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度。2、多次消化。3、消化前預熱胰酶，縮短消化時間。

（2）缺少貼壁因子：血清中含有促貼壁因子，而無血清培養基工藝中由于缺少這種促貼壁因子，細胞的貼壁效果會下降很多。

解決辦法：更換血清。

（3）支原體或細菌的污染。

解決辦法：分離培養物，檢測支原體。清潔支架或培養箱。如發現支原體污染，丟棄培養物。

（4）培養液配置、儲存不當，如 pH 值過堿，Gln 量太少等原因。

解決辦法：使用無菌醋酸溶液調整 pH 值或充入無菌 CO2。

（5）復蘇的細胞本身狀態不好，已經老化，失去貼附性。

解決辦法：啟用新的保種細胞。