細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)血清有哪些類型和作用

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)血清類型全攻略

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發(fā)表時(shí)間:2023-11-01 14:39

今天要聊的話題,培養(yǎng)細(xì)胞的小伙伴肯定不會(huì)陌生生:那些讓細(xì)胞健康茁壯成長(zhǎng)的常用試劑——?jiǎng)游镅澹?/span>

血清在細(xì)胞培養(yǎng)中有點(diǎn)兒像細(xì)胞的“大廚”,它們提供必需的養(yǎng)分、生長(zhǎng)因子和抗體,讓細(xì)胞們可以在培養(yǎng)皿里開心地跳舞。那么,不同種類的血清到底適用于哪些細(xì)胞培養(yǎng)呢?今天就來一場(chǎng)“血清全攻略”,一探究竟!


血清的概述

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,血清是一種關(guān)鍵的培養(yǎng)輔助物質(zhì)。

它是從血液中提取出來的液體,血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后,分離出的淡黃色透明液體(理論上)或指纖維蛋白原已被除去的血漿。

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血清的其主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和各種生長(zhǎng)因子、結(jié)合蛋白、促接觸和生長(zhǎng)因子,使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。

在細(xì)胞培養(yǎng)中,我們通常將血清添加到培養(yǎng)基中,以創(chuàng)造一個(gè)理想的細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境。


血清的分類

動(dòng)物不同,分離出的血清也會(huì)有所不同。

物種來源相同的血清,根據(jù)采血時(shí)間、血源品質(zhì)也會(huì)分出不同的類別。

有些時(shí)候,根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,還要對(duì)血清進(jìn)行一些特殊的加工。

因此,市面上的血清種類也越來越多。


1、牛血清

根據(jù)采血時(shí)間的不同,可分為以下幾種:

胎牛血清】(Foetal Bovine Serum,簡(jiǎn)稱FBS):是采自5-8個(gè)月胎齡牛胚胎。

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【新生牛血清】(Newborn Calf Serum,簡(jiǎn)稱NBCS):0—7天內(nèi)(也有說法是0—30天內(nèi));

【小牛血清】(Calf Serum):采自出生30天——1年的小牛。

【成牛血清】(Adult Bovine Serum,簡(jiǎn)稱ABS):采自成年牛收全血后分離得到血清。


合格的血清產(chǎn)品,需要嚴(yán)格控制采血時(shí)間點(diǎn),才能保證最基本的血清質(zhì)量。以胎牛血清為例:

一旦牛胎齡過長(zhǎng),會(huì)導(dǎo)致補(bǔ)體系統(tǒng)逐漸發(fā)育完全,進(jìn)而使制備的血清中含有補(bǔ)體,影響血清品質(zhì)。另外,胎牛中各類生長(zhǎng)因子也會(huì)隨著生長(zhǎng)發(fā)育而逐漸喪失,進(jìn)一步使血清品質(zhì)下降。

實(shí)驗(yàn)不是千篇一律的,根據(jù)不同的需求,有時(shí)候需要對(duì)血清進(jìn)行一些“定制化處理”。

根據(jù)不同品質(zhì)分為以下幾種:

根據(jù)內(nèi)毒素含量不同,血清可以分為不同品質(zhì):

當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時(shí),此血清為特級(jí)胎牛血清;

當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時(shí),此血清為優(yōu)級(jí)胎牛血清;

當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≥ 25EU/ml時(shí),此血清為標(biāo)準(zhǔn)級(jí)胎牛血清;


根據(jù)不同處理分:

透析胎牛血清:透析過濾去除10000D以下小分子(如次黃嘌呤和胸腺核苷),避免外源小分子對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生干擾。適合脈沖示蹤實(shí)驗(yàn)(例如同位素標(biāo)記特定小分子,并加入到培養(yǎng)體系中,以研究細(xì)胞代謝),也適合轉(zhuǎn)染CHO后的篩選等應(yīng)用。

去外泌體血清:通過超速離心法或純化柱,去除絕大部分外泌體的血清,適用于外泌體相關(guān)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究。

超低lgG的血清:使用親和層析等工藝,去除IgG,使其水平低于要求值,可用于抗體、病毒和病毒反應(yīng)以及細(xì)胞表面抗原表位相關(guān)研究。

活性炭/葡聚糖處理的血清:可降低血清中類固醇激素的濃度,例如雌二醇、孕酮、皮質(zhì)醇、睪酮、T3 和 T4。適用于相關(guān)激素研究的實(shí)驗(yàn)。


2、馬血清

馬血清一般分為兩種:

**種馬血清含有的大分子蛋白比較多,適用于蛋白封閉;

第二種馬血清為細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別。它經(jīng)過多次過濾,祛除了許多大分子蛋白,但保留了血清中促細(xì)胞生長(zhǎng)的活性因子,因而能用于細(xì)胞培養(yǎng),例如神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),培養(yǎng)基中則需要添加馬血清。

優(yōu)質(zhì)的馬血清來自健康馬血液,為封閉系統(tǒng)內(nèi)無(wú)菌采血過濾而成,超低內(nèi)毒素,無(wú)溶血,無(wú)異物,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體、噬菌體等。

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3、豬血清

豬血清,常用于豬肺炎支原體疫苗的生產(chǎn)。

在對(duì)細(xì)胞和活疫苗進(jìn)行支原體檢驗(yàn)中,《獸藥典》也明確推薦了豬血清作為支原體檢驗(yàn)用液體培養(yǎng)基的組成成分。

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并且,《獸藥典》指出在【豬支原體肺炎微量間接血凝試驗(yàn)】和【豬支氣管敗血波氏桿菌凝集試驗(yàn)】中需要陰性血清,即優(yōu)質(zhì)的豬血清,血源必然來自健康動(dòng)物。

1989年左右,也有國(guó)外學(xué)者建議用豬血清取代牛血清,用于培養(yǎng)制造非洲豬瘟病毒的細(xì)胞(見《動(dòng)物檢疫》 1991年01期《豬血清中的牛血清白蛋白抗體引起非洲豬瘟血清學(xué)診斷的假陽(yáng)性反應(yīng)》),原因是牛血清中的白蛋白會(huì)干擾非洲豬瘟抗體的檢測(cè),造成假陽(yáng)性反應(yīng)。

4、其他動(dòng)物源血清

兔血清:

兔血清通常從六個(gè)月或更小的動(dòng)物身上收集,可用于與 BSA 結(jié)合用作免疫細(xì)胞化學(xué)[1]和免疫組織化學(xué)中的封閉血清[2]。

山羊血清:

多用做封閉液,也有一些研究人員發(fā)現(xiàn),優(yōu)質(zhì)的山羊血清可用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)[3][4]。

雞血清:

從屠宰供人類食用的健康雞中收集的。有研究用于血清維生素 B12 的放射性同位素稀釋測(cè)定[5]。


如何挑選合適的血清

在選擇血清時(shí),需要考慮以下因素:

  • 細(xì)胞類型:了解你的細(xì)胞類型對(duì)選擇合適的血清至關(guān)重要。不同類型的細(xì)胞可能需要不同種類的血清。

  • 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模耗愕难芯磕康囊矔?huì)影響血清的選擇。不同血清可能含有不同的生長(zhǎng)因子和抗體,適合不同類型的實(shí)驗(yàn)。

  • 質(zhì)量和來源:選購(gòu)高質(zhì)量的血清。

為了選擇合適的血清,盡量進(jìn)行小規(guī)模的試驗(yàn),以確保它能滿足實(shí)驗(yàn)需求。因此供應(yīng)商能否提供試用很關(guān)鍵。

Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清,精選內(nèi)毒素更低批次(≤3EU/ml),澳洲血源,新批次在試用前,提供試用服務(wù),養(yǎng)細(xì)胞更放心,全程冷鏈運(yùn)輸,避免反復(fù)凍融。

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在細(xì)胞培養(yǎng)中,血清是細(xì)胞健康生長(zhǎng)的關(guān)鍵因素之一。通過了解不同種類的血清和選擇適合你實(shí)驗(yàn)的血清,為科研工作打下基礎(chǔ)。

如果你對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)或其他相關(guān)主題有更多疑問,歡迎留言或私信!


參考文獻(xiàn):

[1]Fr?hlich, E., Brossart, P., Wahl, R., Effects of retinoids on porcine thyrocytes under different culture conditions. The Histochemical Journal 33: 295–304, 2001. ? 2001 Kluwer Academic Publishers. Printed in the Netherlands

[2]Schrans-Stassen, B.,   Saunders, P.,   Cooke, H., de Rooij, D. Nature of the spermatogenic arrest in dazl 2/2 mice. Biology Of Reproduction 65, 771–776 (2001)

[3]Paranjape S., Goat serum: An alternative to fetal bovine serum…, Indian J Exp Biol. 2004 Jan;42(1):26-35.

[4]Nanda PK, Swain P, Nayak SK, Dash S, Routray P, Swain SK, Patra BC, Goat Serum as an alternative…, in Vitro Cell Dev Biol Anim. 2009 Mar-Apr;45(3-4):148-51. Epub 2009 Jan 1

[5]Newmark, P., Green, R., Musso, A., Mollin, D. A comparison of the properties of chicken serum with other vitamin B12…, British Journal of Haematology Volume 25 Issue 3, Pages 359 – 373 Published Online: 12 Mar 2008 ? 2010 Blackwell Publishing Ltd

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