透析胎牛血清的制備方法與應(yīng)用

胎牛血清是廣泛用于細(xì)胞培養(yǎng)基的重要成分，提供了多種生物活性物質(zhì)，包括激素、生長因子、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、黏附和鋪展因子，以促進(jìn)體外細(xì)胞培養(yǎng)。然而，在特定研究領(lǐng)域，透析胎牛血清也被用于滿足研究需求。下文將從生產(chǎn)工藝和應(yīng)用方面對(duì)透析胎牛血清進(jìn)行綜合介紹，以促進(jìn)相關(guān)研究和應(yīng)用的進(jìn)行。

1. 透析胎牛血清的制備

a. 透析胎牛血清是基于普通胎牛血清進(jìn)行特殊處理的產(chǎn)品。在制備過程中，普通胎牛血清需要經(jīng)過嚴(yán)格的無菌處理，包括0.1微米膜三重過濾以及各項(xiàng)檢測(cè)，如理化性質(zhì)（如滲透壓和pH值），成分（如內(nèi)毒素和血紅蛋白）以及外源因子（如細(xì)菌、病毒和支原體），以確保其質(zhì)量和安全性。

b. 透析胎牛血清的制備涉及透析過程，通過特定的透析膜在4°C下將血清透析在0.15M NaCl中。這個(gè)透析膜只允許小于10 kDa的小分子通過，這些小分子在滲透壓的作用下從血清中滲析到透析膜外的NaCl溶液中。透析的終止通常是當(dāng)血清中葡萄糖濃度降至<5 mg/dL時(shí)，但透析過程還需要仔細(xì)監(jiān)測(cè)pH值和滲透壓。

c. 透析過程采用切向流過濾，即流體與過濾方向垂直的過濾方式，以減小濾膜上的物質(zhì)堆積，確保穩(wěn)定的過濾速度。

2. 透析胎牛血清的應(yīng)用

透析胎牛血清主要用于特殊研究領(lǐng)域，其中需要關(guān)注小分子濃度的應(yīng)用，包括以下四個(gè)領(lǐng)域，它們有時(shí)相互交叉。

a. 同位素標(biāo)記技術(shù)在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用。

同位素標(biāo)記技術(shù)，例如Stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC)，是一種基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)。它通過將13C或15N標(biāo)記的氨基酸引入培養(yǎng)基，標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)新合成的蛋白質(zhì)，用于比較不同處理下的細(xì)胞蛋白質(zhì)豐度。透析胎牛血清可用于排除天然氨基酸的干擾，以確保標(biāo)記氨基酸的準(zhǔn)確性。

b. 工程細(xì)胞株的篩選。

例如，CHO-DFGRˉ細(xì)胞株需要在培養(yǎng)基中添加次黃嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸才能生存。透析胎牛血清可用作選擇培養(yǎng)基的一部分，以幫助篩選經(jīng)過基因工程的細(xì)胞株。

c. 研究某些因子對(duì)細(xì)胞增殖和分化的影響。

透析胎牛血清可用于研究核苷酸、微量元素等對(duì)細(xì)胞的影響，以避免培養(yǎng)體系中的干擾物質(zhì)。