細胞爬片免疫熒光實驗步驟

細胞爬片免疫熒光實驗步驟

細胞爬片：在6孔板中，用無菌鑷子將細胞爬片放在每個孔的底部，輕輕放平，使細胞貼附在爬片上。加入適量培養(yǎng)基，置入37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞生長至80%左右時進行下一步操作。

細胞固定：取出培養(yǎng)板，用無菌PBS洗去培養(yǎng)基，加入適量4%多聚甲醛固定細胞10分鐘，然后用PBS洗去固定液，再用無菌濾紙吸干爬片表面的水分。

細胞通透：加入適量0.2% Triton X-100進行細胞通透，放置5分鐘，然后用PBS洗去通透液，再用無菌濾紙吸干爬片表面的水分。

免疫熒光染色：取出預(yù)冷的抗體稀釋液，加入適量抗體（根據(jù)需要選擇相應(yīng)的抗體），充分混勻后，將抗體稀釋液加入細胞爬片中，輕輕搖晃，使抗體與細胞充分接觸，放入4℃冰箱中孵育過夜。

清洗：取出細胞爬片，用無菌PBS洗去未結(jié)合的抗體，再用無菌濾紙吸干爬片表面的水分。

封片：加入適量熒光素標記的二抗（根據(jù)選擇的抗體種類不同而異），與爬片上的細胞充分接觸，室溫下孵育1小時，然后用PBS洗去未結(jié)合的二抗，再用無菌濾紙吸干爬片表面的水分。

觀察：將細胞爬片放在熒光顯微鏡下觀察并拍照。

以上是細胞爬片免疫熒光實驗的一般步驟，具體操作應(yīng)根據(jù)實際需要進行調(diào)整。