細胞培養使用支原體抑制劑（清除劑）的方法步驟

細胞培養是生物學領域重要的研究工具。支原體污染，是細胞實驗過程中常見的微生物污染之一。支原體污染，可直接影響細胞狀態，造勢實驗結果可信度降低、可重復性差等問題。

因此，在日常實驗過程中，應注重實驗室的清潔工作。普通細胞一旦發生支原體污染，建議直接丟棄并對實驗環境進行消殺。如果是非常珍貴的細胞，不能隨意丟棄，則需要使用支原體抑制劑/清除劑。

德國Minerva Biolabs公司生產的支原體清除試劑系列：Zell Shield、Mynox、Mynox Gold，可高效清除支原體污染。

對于費力擴增的細胞（如已轉染，或經過體外刺激），如果細胞中發現有支原體污染，但此細胞又不愿丟棄，希望繼續培養，推薦使用MB公司生產的復合抗生素Zell Shield 細胞支原體去除劑。

（1）在每次使用Zell Shield?之前，細胞傳代時，先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法”處理好細胞，再使用加了Zell Shield?的培養基養細胞，能達到更好的祛除支原體的效果。

（2）Zell Shield?常規為-18℃保存，建議使用前，先融化分裝，仍舊-18℃避光保存，使用時按需融化配制。避免反復凍融。

（3）Zell Shield?按1:100濃度可直接加入培養基。例如：500ml培養基中添加5ml Zell Shield?，50mL/瓶的Zell Shield?可供5L培養基使用。

若是無法長期培養的珍貴樣本或病毒收獲液，則推薦使用德國MB公司的Mynox? ，處理3小時，直接殺除。

（1）將200μLMynox治療液于2.8ml培養液（FBS濃度未5%）混合，加入10^4-10^5個細胞。孵育2-3小時。

（2）終止治療，為細胞換液。

（3）使用原有正常培養液，傳代3-4次（FBS恢復至原有濃度）。

（4）取樣，PCR檢測，鑒定支原體是否清除徹底。

非常珍貴的細胞或不易獲得的生物樣本，被支原體污染了，但需要挽救，不能丟棄，例如：珍稀的細胞種子。可采用支原體徹底清除法。若是可以培養超過一個月的細胞，則推薦使用德國MB公司的Mynox? Gold珍貴細胞株 支原體清除劑，直接殺除+鞏固防護兩步處理。

（1）將500μL初次治療液與含5%FBS的4.5ml培養液，于離心管中混合均勻。

（2）將配制好的治療液培養基轉移至培養瓶或培養皿中。

（3）加入10^4-10^5個細胞。

（4）培養細胞至80%-90%匯合度。

（5）細胞傳代，將需要傳代的細胞、鞏固治療液、9.5ml原有培養基混合均勻后，轉移至培養瓶或者培養皿中。

（6）重復（4）（5）2次后，再次傳代，不添加Mynox Gold。

（7）取樣，PCR檢測，鑒定支原體是否清除徹底。

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