qPCR凍干粉試劑——支原體qPCR支原體檢測(cè)的實(shí)力派

隨著細(xì)胞治療等生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展，各國(guó)法規(guī)和相關(guān)機(jī)構(gòu)，也逐步加強(qiáng)了，對(duì)生物制品安全性和可靠性的監(jiān)管。其中支原體檢測(cè)，是一個(gè)關(guān)鍵項(xiàng)目。

在各國(guó)藥典中均指出，可以使用經(jīng)過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證的核酸法，可替代培養(yǎng)法和指示細(xì)胞法，對(duì)相關(guān)生物產(chǎn)品進(jìn)行支原體檢測(cè)。因此，在進(jìn)行支原體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)選擇通過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證的qPCR試劑盒，兼顧靈敏度和特異性，實(shí)現(xiàn)高效且精準(zhǔn)的檢測(cè)。

如何實(shí)現(xiàn)檢測(cè)的高效與精準(zhǔn)生物試劑，尤其是具有活性或功能的試劑，對(duì)于產(chǎn)品的劑型、儲(chǔ)存方法、運(yùn)輸溫度都有比較高的要求。

劑型決定了產(chǎn)品本身是否穩(wěn)定穩(wěn)定，而穩(wěn)定性又進(jìn)一步?jīng)Q定了產(chǎn)品儲(chǔ)存和運(yùn)輸甚至是使用方法的難易程度。

穩(wěn)定性越好的產(chǎn)品，對(duì)于儲(chǔ)存、運(yùn)輸過(guò)程的溫度要求相對(duì)更簡(jiǎn)單，操作難度小，產(chǎn)品則更易保留更大的活性，更容易實(shí)現(xiàn)高效且精準(zhǔn)的qPCR檢測(cè)結(jié)果。

不同劑型的比較用于方法驗(yàn)證的支原體檢測(cè)試劑盒以qPCR法為主。目前，市場(chǎng)上大多數(shù)支原體檢測(cè)類的qPCR試劑盒，其試劑多以液體劑型為主。

實(shí)際生產(chǎn)、運(yùn)輸、使用過(guò)程中，液體試劑很容易發(fā)生失活的情況：

凍干粉試劑的特點(diǎn)

為了克服液體試劑的缺點(diǎn)，盡可能保留生物試劑的活性不因溫度的改變而被破壞，德國(guó)MB公司的qPCR檢測(cè)試劑盒，采用了新型的凍干粉劑型。

穩(wěn)定性強(qiáng)：凍干粉試劑在制備過(guò)程中經(jīng)過(guò)冷凍和真空干燥處理，去除了水分，活性物質(zhì)處于“休眠狀態(tài)”，進(jìn)而有助于提高試劑的穩(wěn)定性。

運(yùn)輸條件相對(duì)簡(jiǎn)單：因此相比于液體試劑，凍干粉試劑更適合長(zhǎng)期存儲(chǔ)和運(yùn)輸，對(duì)溫度的要求也寬松，4℃（冷鏈溫度：2-8℃）即可，減少了對(duì)冷凍設(shè)備的依賴，操作運(yùn)輸簡(jiǎn)便且容錯(cuò)率高，減少了失活的可能性。

降低污染可能性，適合長(zhǎng)期儲(chǔ)存和長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)輸，結(jié)果更可靠：由于水分被去除，也減少了其中微生物生長(zhǎng)繁殖的可能性，降低了試劑被微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。因此，與液體試劑相比，凍干粉試劑更適合長(zhǎng)期保存與運(yùn)輸，進(jìn)一步提高結(jié)果的可靠性。

降低氧化反應(yīng)：水溶液的存在，容易促使一些氧化反應(yīng)的發(fā)生，從而導(dǎo)致試劑失活。凍干粉中的低水分含量有助于防止這些氧化反應(yīng)的發(fā)生，維持試劑的活性。

德國(guó)Minerva Biolabs公司生產(chǎn)的支原體qPCR檢測(cè)系列試劑盒，如：Venor?Gem qEP，貨號(hào)：11-9025、11-9100、11-9250，試劑采用凍干粉形式，使用時(shí)復(fù)溶即可，盡可能保持試劑的活性，為支原體檢測(cè)提供更穩(wěn)定準(zhǔn)確的結(jié)果，完成高靈敏度、強(qiáng)特異性的方法驗(yàn)證。

德國(guó)MB支原體檢測(cè)試劑盒（Venor?Gem qEP）特點(diǎn)：

①遵循歐洲藥典流程要求。

②高特異性，一次檢測(cè)即可涵蓋了所有可能感染細(xì)胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體），根據(jù)序列一致性，至少可以檢測(cè)到107種支原體物種。操作簡(jiǎn)單，易于觀察（使用MB的試劑盒，下表中列出的支原體物種均為陽(yáng)性，其他微生物或真核細(xì)胞均為陰性，無(wú)交叉反應(yīng)）。

③高靈敏度，MB公司的支原體qPCR檢測(cè)試劑盒檢測(cè)限可低至≤10CFU/ml。

④MB公司有相應(yīng)配套的10CFU/100CFU的敏感度測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)品，便于方法學(xué)驗(yàn)證。

⑤MB公司有相應(yīng)配套的支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA，便于特異性驗(yàn)證。

⑥MB公司有相應(yīng)配套的支原體定量標(biāo)準(zhǔn)品，便于最后定量檢測(cè)。