PCR結果為何會出現“假陽”，如何避免？

PCR技術在疫病診斷，疫情控制等方面成為了有力工具。但由于PCR技術的高度敏感性，PCR技術要求高、影響因素多，從樣品制備到結果的產生，任何一處細微的失誤均會造成結果的偏差，導致樣品的假陽性結果。PCR結果為何會出現“假陽”，如何避免？

檢測方法試劑靈敏性高/特異性差：

使用高靈敏度/特異性差的檢測試劑盒對樣品檢測時，可能會出現非特異性擴增造成假陽性。如果出現異常樣本可對實驗環境進行消毒后，進行提取/核酸樣本設置數個平行對照復檢。也可使用質控良好多家試劑盒進行對照復測。如有需求可對樣品進行抗體檢測或使用其他檢測方法復測。

可使用締一生物提供的德國MB公司Venor?Gem qEP   支原體qPCR檢測試劑盒，符合歐洲藥典EP、美國藥典USP、日本藥典JP、中國藥典等各國藥典要求，可在細胞和生物制品，如Car-T、細胞免疫、抗體藥、疫苗等項目中，替代培養法進行支原體檢測。高特異性！一次檢測即可涵蓋，所有可能感染細胞的支原體物種。高靈敏度！檢測限可達≤10CFU/ml。

陽性樣本交叉污染：

采集樣本時操作不規范導致批次樣本出現污染：使用一次性采樣器具進行樣品采集。同一批次不同樣品單獨隔離存放。樣本處理前對實驗耗材及實驗室操作環境及時消毒。收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴導致外溢：保證樣本運輸及樣本預處理前嚴格密封；樣本預處理前對包裝外表面進行消毒處理。樣本處理前后對實驗耗材及實驗室操作環境及時消毒。樣本前處理時確認樣本液體無外溢和離心管蓋完全密封，一旦出現外溢需立即清理消毒防止交叉污染。樣本前處理時正確佩戴一次性手套和及時對手套進行消毒。實驗過程中的不規范操作造成陽性樣本樣本交叉污染。每次實驗前移液器，離心管板架等實驗器具及耗材消毒滅菌。不同樣本使用移液器移液時需更換濾芯移液槍頭。加樣及移液時避免反復吹吸造成樣本液體外濺或導致形成氣溶膠造成氣體擴散污染。不同樣本不同時開蓋，樣本震蕩時需保證離心管或PCR反應管蓋蓋緊。PCR反應管上機時管蓋必須蓋緊，避免反應時高溫反應液氣體泄漏，影響儀器判讀及造成核酸對環境的污染。正確佩戴及勤換手套，實驗操作過程中全程穿戴防護服。實驗結束后一次性耗材與實驗室垃圾使用氯制劑噴灑或浸泡消毒后再處理。

3病毒DNA氣溶膠污染（環境、儀器、人員、試劑、耗材）

對實驗室環境進行合理分區，保證核酸提取室和配液室分區，不同分區的實驗室耗材、儀器不共用。
實驗室環境定期使用含氯制劑進行核酸消毒，熒光PCR儀使用75%酒精進行消毒，消毒后用純凈水擦拭。實驗室定期采樣自檢，實驗室出現病毒核酸污染后需對實驗室人員及環境進行全面消毒及采樣自檢，全部陰性后再正常啟用實驗室。

4儀器設備存在判讀問題或曲線閾值異常：

儀器軟件和電腦軟件的匹配度低，儀器熒光通道、信號處理系統不穩定：使用目前市場上質量品控良好的熒光PCR儀。

實驗室用電環境電壓不穩、斷電: 可對實驗室接入電源和穩壓設備。

熒光PCR系統ROX參比熒光未修改：取消熒光PCR儀軟件程序ROX參比熒光讀取。

反應體系內存在異物，反應體系的

PCR耗材品質差：使用品質合格的

PCR耗材：密封性能好，低蒸發，管蓋易開合。

透明部位透光性好，導熱精確，低吸附。

采用優質醫療級PP原料生產，耐熱性好。

無DNase，RNase，Pyrogen。

PCR耗材在受控的萬級無塵車間生產。