細胞支原體污染檢測方法——支原體PCR檢測試劑盒

細胞培養被支原體污染是極普遍的問題，面對支原體污染給細胞培養帶來的巨大難題，世界各國開始重視，并相繼建立了細胞庫，對細胞質量進展控制，效果顯著，支原體污染的問題得以限制。目前已知能污染細胞的支原體有20多種以上，其中95％以上的支原體污染是口腔支原體。

支原體污染的檢測及鑒定方法有培養法、熒光染色法、掃描電子顯微鏡法、PCR法。

今天我們來聊聊PCR法。

該實驗具有靈敏度高、特異性強、快速的特點，但其對實驗環境的要求嚴格，實驗成本較高，有時還有假陽性的現象出現。

PCR 法檢測支原體污染的基本原理是酶促 DNA 合成反應，即在 DNA 模板、引物和脫氧核糖核酸存在下，經 DNA 聚合酶的作用，使 DNA 鏈擴增延伸。

北京締一生物科技有限公司 國內總代理的德國MB 產品

常規PCR Kit （一步法）   Venor Gem OneStep

常規PCR法介紹

常規PCR法：是根據支原體核糖體16s-23s rRNA的特異保守序列設計引物，對待檢樣本DNA進行擴增，通過對擴增產物的大小分析作出診斷。

優點：①靈敏度高，特異性好。②時間短，2-3小時出結果。③符合歐洲藥典。④操作簡單。

缺點：①對于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結果會出現假陽性（可用培養法做補充驗證）。②不同廠家生產的試劑盒質量差異巨大（由于引物及內在設計不同），需謹慎選擇，盡量在專業人員推薦指導下使用。

『支原體常規PCR檢測試劑盒』介紹

德國MB公司生產的支原體常規PCR檢測試劑盒，依據操作步驟的細微差別，分一步法和經典法兩類。此兩類試劑盒較全球其他廠家同類產品，具有以下獨特的優點：

①符合歐洲藥典要求。

②高特異性，一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體），根據序列一致性，至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單，易于觀察（使用MB的試劑盒，下表中列出的支原體物種均為陽性，其他微生物或真核細胞均為陰性，無交叉反應）。

支原體PCR檢測試劑盒（一步法）特點

1. 內控對照已加在預混液中，無需另外配置，使用便捷。

2.高特異性，僅一條陽性對照條帶，即可涵蓋所有可能感染細胞的支原體物種。

3.操作簡單，易于觀察。

4.高靈敏度，1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。

5.歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無膽甾原體和85種支原體。