熒光定量PCR和逆轉(zhuǎn)錄qPCR有何區(qū)別？

熒光定量PCR（qPCR）在PCR反應(yīng)進(jìn)行的同時(shí)，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和記錄DNA或RNA的擴(kuò)增過(guò)程，而無(wú)需在反應(yīng)結(jié)束后進(jìn)行分析。這一特性使得實(shí)時(shí)PCR能夠提供更準(zhǔn)確、靈敏和快速的定量分析。

熒光探針： 實(shí)時(shí)PCR使用熒光標(biāo)記的DNA探針，通常有兩種類型：SYBR Green和探針探測(cè)法。SYBR Green與所有雙鏈DNA結(jié)合并發(fā)光，而探針探測(cè)法使用特定探針與目標(biāo)序列結(jié)合發(fā)光。

PCR反應(yīng)： 在PCR反應(yīng)中，熒光信號(hào)與擴(kuò)增的DNA量成正比。隨著PCR的進(jìn)行，熒光信號(hào)實(shí)時(shí)被監(jiān)測(cè)。

實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)： PCR儀器能夠在每個(gè)PCR循環(huán)中實(shí)時(shí)測(cè)量熒光信號(hào)的強(qiáng)度，記錄在PCR反應(yīng)過(guò)程中DNA量的變化。

定量分析：通過(guò)與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，可以確定初始模板的數(shù)量，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)序列的定量分析。

qPCR用于精確、定量測(cè)量目標(biāo)DNA或RNA的數(shù)量，通常用于基因表達(dá)分析、病原體定量檢測(cè)、突變分析等。qPCR是一個(gè)定量的技術(shù)，可以提供精確的分析結(jié)果。

病原體檢測(cè)和量化：

• 在臨床診斷中用于檢測(cè)和定量病毒、細(xì)菌等病原體的核酸，如檢測(cè)流感病毒等。

• 用于監(jiān)測(cè)感染性疾病的病程和治療效果。

突變分析：

• 用于檢測(cè)DNA序列中的點(diǎn)突變、插入和缺失，有助于遺傳病變的分析。

• 在癌癥研究中用于檢測(cè)腫瘤相關(guān)基因的突變。

轉(zhuǎn)基因檢測(cè)和定量：

• 用于檢測(cè)和定量轉(zhuǎn)基因植物或動(dòng)物中的外源基因。

• 在食品安全領(lǐng)域用于檢測(cè)食品中是否存在轉(zhuǎn)基因成分。

微生物學(xué)研究：

• 用于定量測(cè)量環(huán)境樣本中的微生物數(shù)量，研究微生物在環(huán)境中的分布和變化。

藥物研發(fā)和評(píng)估：

• 用于研究藥物對(duì)基因表達(dá)的影響，評(píng)估藥物在細(xì)胞水平上的效果。

• 用于篩選潛在藥物靶點(diǎn)和藥物治療的效果。

• 新藥上市前支原體檢測(cè)

環(huán)境監(jiān)測(cè)：

• 用于監(jiān)測(cè)環(huán)境中的污染物，如檢測(cè)空氣、水和土壤中的微生物和病原體。

• 在環(huán)境生物學(xué)研究中應(yīng)用于生態(tài)系統(tǒng)的研究。

生物標(biāo)記物的定量分析：

• 用于定量測(cè)量生物標(biāo)記物的數(shù)量，如檢測(cè)血液中的特定蛋白質(zhì)或核酸。

逆轉(zhuǎn)錄qPCR real-time RT-PCR

real-time RT-PCR的中文名稱是實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)，是一種結(jié)合了逆轉(zhuǎn)錄（RT）和實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qPCR）的技術(shù)，用于從RNA樣本中合成相應(yīng)的cDNA，并在逆轉(zhuǎn)錄的同時(shí)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和定量擴(kuò)增特定的RNA序列。