德國MB支原體標準品凍干粉常見問題和解答

德國MB廠家具有ISO 9001和ISO 13485體系認證。每個批次支原體標準品都有驗證和質控。同時支原體培養所用的培養基每個批次都依據EDQM（European Directorate for the Quality of Medicines）標準經過驗證和質控。標準品每一批的質控證書（COA）可從廠家網站上下載。支原體菌株來自英國NCTC菌種保藏中心，也有相應的ATCC編號。

10CFU標準品，驗證實驗中用量，即驗證實驗時需多少有效數據？

答：10CFU標準品，使用時需要用1ml你的樣本基質（如培養基）溶解，然后需要提取支原體DNA，以保證最高靈敏度（推薦MB公司的支原體DNA提取試劑盒）。每個DNA純化柱需要樣本量是200ul，產出是50ul。每個qPCR反應需要加DNA樣本量是10ul。MB廠家推薦1個樣本是8個復孔。一般靈敏度與耐用性（Robust）是在一起驗證的，也就是說，要前后做3輪獨立試驗，每次每個樣本建議是8個復孔，這樣計算下來，2管10CFU標準品是夠用了，這也正是10CFU標準品現在的包裝。說明：為保證結果可靠性，還需要同時做陰性對照。

如何驗證滅活菌和活菌是一樣的？

因活支原體會造成實驗室污染（這對用戶來說是不可接受的），所以標準品采用的是滅活支原體。滅活支原體也是通過活支原體培養后再定量和滅活而來，它和活支原體的檢測是一樣的。最終檢測結果說明一切。

問：溶解標準品后，抽提是否全抽完，還是也可以保存

廠家建議10CFU標準品復溶了以后，要立即抽提，不要再保存，因為擔心可能降解。

問：您好，我這邊要提取10cfu對照品的基因組，10cfu對照品的說明書寫著用1ml基質重懸，基因提取試劑盒說一次上樣200μl進行提取，想問您一下，用200μl基質重懸10cfu可以嗎，想一次提完。

答：還是建議用1ml的基質重懸，因為靈敏度是以10CFU/ml為單位的。如果用200ul，濃度就高了。廠家建議10CFU標準品復溶了以后，要立即用完，不要再保存，擔心可能降解。

問：那1ml溶解的標準品，按提取試劑盒的要求，就得用多個管子一次提完對吧？

答：是的。

問：支原體10cfu標準品是干粉吧？ 配完后是多少體積？

答：是凍干粉，加基質液后是1ML體積。

問：基質液產品里帶嗎？

答：這個產品里不帶，是客戶自己要檢測哪類樣品，就用樣品里的基質液（例如用的哪個培養基）

問：標準品用1ml溶解，就是用培養基？

是用樣本基質，要看客戶樣本是什么。如果是細胞上清，那就是用細胞培養基。要注意，溶解標準品的細胞培養基應沒有支原體污染。標準品同時帶陰性對照，陰性對照也是用培養基溶。