PCR實驗中Taq DNA聚合酶和Pfu DNA聚合酶介紹

Taq DNA聚合酶和Pfu DNA聚合酶介紹

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發(fā)表時間：2024-01-18 16:46

PCR實驗中Taq DNA聚合酶和Pfu DNA聚合酶介紹。

DNA聚合酶是一類酶的總稱，有多種種類，每種都具有不同的特性和應(yīng)用。今天跟大家介紹的就是Taq DNA聚合酶和Pfu DNA聚合酶。

Taq DNA聚合酶

來源

從耐熱細(xì)菌Thermus aquaticus中分離得到。

特點

耐熱性：Taq DNA聚合酶的適宜工作溫度通常在70°C至75°C之間。這使得Taq DNA聚合酶非常適合PCR反應(yīng)，因為PCR需要在每個循環(huán)中通過高溫步驟來分離DNA鏈。

5'→3'聚合酶活性 Taq DNA聚合酶具有5'→3'聚合酶活性，即它能夠在DNA鏈的5'端到3'端方向上合成新的DNA鏈。

沒有3'→5'外切酶活性 與一些其他DNA聚合酶不同，Taq DNA聚合酶不具備3'→5'外切酶活性，這意味著它缺乏校正能力，容易引入突變。因此，在PCR反應(yīng)中，Taq DNA聚合酶的錯誤率相對較高。

DNA模板依賴性：Taq DNA聚合酶對于DNA模板的依賴性較強(qiáng)，需要引物（primer）提供3'端的OH基團(tuán)，作為新DNA鏈的起始點。

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Pfu DNA聚合酶

來源

從嗜熱古細(xì)菌Pyrococcus furiosus中分離得到。

特點

高度的3'→5'外切酶活性：Pfu DNA聚合酶表現(xiàn)出高度的外切酶活性，使得其能夠進(jìn)行校對，糾正PCR反應(yīng)中可能發(fā)生的錯誤。這有助于提高擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性。

高保真度：由于其強(qiáng)大的外切酶活性，Pfu DNA聚合酶在PCR反應(yīng)中具有更低的錯誤率，提供高度保真的DNA合成。

溫度適應(yīng)性：Pfu DNA聚合酶在較高的溫度范圍內(nèi)（通常在72°C至75°C）表現(xiàn)出較高的活性，適用于PCR反應(yīng)的高溫步驟。

缺乏5'→3'外切酶活性：與一些其他聚合酶不同，Pfu DNA聚合酶通常不具備5'→3'外切酶活性，因此不會引入額外的5'端修飾。

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德國Minerva Biolabs公司生產(chǎn)的 Taq DNA聚合酶是一種高效的5‘→3’聚合酶，沒有3‘→5’外切核酸酶活性。在72℃和pH9的條件下，MB Taq DNA聚合酶達(dá)到其最高水平的活性，能夠在30秒內(nèi)擴(kuò)增1 kb DNA。

Taq的活性在室溫時被阻斷，例如在準(zhǔn)備樣品時。當(dāng)溫度高于70℃時，Taq聚合酶的抑制被完全逆轉(zhuǎn)。在94℃2分鐘后聚合酶達(dá)到完全活化。MBTaq DNA聚合酶帶有10x緩沖液，能獲得更大產(chǎn)率和靈敏度，這應(yīng)符合大多數(shù)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用。

MB Taq 熱啟動DNA聚合酶推薦使用/范圍：

常規(guī)和多重PCR；實時PCR；T/A克隆；生物素/地高辛或放射性核苷酸進(jìn)行DNA標(biāo)記；雙鏈或單鏈標(biāo)準(zhǔn)DNA測序。

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