細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中懷疑被支原體污染怎么辦？

如果細(xì)胞培養(yǎng)懷疑被支原體污染，可以采取以下措施進(jìn)行處理：

確認(rèn)支原體污染：可以通過(guò)支原體PCR檢測(cè)試劑盒對(duì)支原體DNA進(jìn)行檢測(cè)，確認(rèn)是否存在支原體污染。

清除支原體：如果確認(rèn)存在支原體污染，可以采用清洗純化法清除支原體。具體方法包括細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)馴化、優(yōu)質(zhì)細(xì)胞群的篩選、細(xì)胞清洗、反復(fù)離心洗滌等步驟。

限制使用的要求：若無(wú)法避免使用可能受到支原體污染的細(xì)胞系，可以采用限制使用的方式，**程度減少污染的范圍和影響。這可以通過(guò)降低細(xì)胞傳代次數(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)，細(xì)胞傳代次數(shù)越少，支原體的繁殖和擴(kuò)散機(jī)會(huì)就越少。

加強(qiáng)設(shè)備管理：使用過(guò)的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)液和細(xì)胞等應(yīng)立即丟棄，并進(jìn)行消毒處理。細(xì)胞房環(huán)境要做全面的消殺，以及人員手部等防止二次污染！

防止交叉污染：在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，避免交叉污染。無(wú)菌操作包括但不限于穿戴專門(mén)的工作服和鞋子，對(duì)所有實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行消毒，以及在實(shí)驗(yàn)前后對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行徹底的清潔和消毒。

其他方法：如紫外線照射、高溫滅菌、添加抗生素等也可以有效地消除支原體污染。但是，這些方法都有一定的局限性，需要根據(jù)具體情況進(jìn)行選擇和應(yīng)用。

總之，如果懷疑細(xì)胞培養(yǎng)被支原體污染，應(yīng)采取一系列措施進(jìn)行處理，包括確認(rèn)污染、清除支原體、限制使用、加強(qiáng)設(shè)備管理和防止交叉污染等。同時(shí)，也應(yīng)采取其他方法進(jìn)行預(yù)防和治療。

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支原體熒光定量PCR 法(gPCR） : 是在常規(guī) PCR 基礎(chǔ)上，將 [針對(duì)支原體特異性保守序列的探針，做熒光標(biāo)記，使 PCR 擴(kuò)增后的產(chǎn)物帶有熒光，利用熒光信號(hào)的變化和配套軟件，進(jìn)行 DNA 擴(kuò)增反應(yīng)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，簡(jiǎn)稱gPCR。