哪種支原體DNA檢測方法更便捷？

支原體污染細(xì)胞后，多數(shù)情況下細(xì)胞病理變化不顯著，細(xì)微變化也可由于傳代、換液而緩解，因此易被忽視。但個(gè)別嚴(yán)重者，可致細(xì)胞增殖緩慢，甚至從培養(yǎng)器皿脫落。

為確定有無支原體污染,常用的檢測方法有：

相差顯微境檢測

將細(xì)胞按種于事先放置于培養(yǎng)瓶內(nèi)的蓋玻片上，24h后取出，用相差油鏡觀察，支原體呈暗色微小顆粒位于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。

熒光染色法

熒光染色用能與DNA特異性結(jié)合的熒光染料Hoechst 33258，可使支原體內(nèi)含有的DNA著色，染色后用熒光顯微鏡觀察。

支原體用普通染色法不易著色，用姬姆薩染色很淺，革蘭染色為陰性。

電鏡檢查

用掃描電鏡方法簡便快速，也可以利用透射電鏡。

4DNA分子條文檢查或支原體培養(yǎng)等方法

檢出率高，但方法較為復(fù)雜。

一般工業(yè)上常用的是最后一種方法—培養(yǎng)檢測法。

目前支原體培養(yǎng)檢測的周期是28天。美國藥典、歐洲藥典認(rèn)可經(jīng)過驗(yàn)證的核酸檢測（如實(shí)時(shí)PCR）作為傳統(tǒng)的支原體檢測的替代方法。

既然傳統(tǒng)的培養(yǎng)耗時(shí)較長，那有沒有一種精確又快速的檢測方法呢？

答案是肯定的。

北京締一生物科技有限公司 國內(nèi)總代理的德國MB 產(chǎn)品

qPCR Kit   (經(jīng)典法)   Venor Gem qEP

支原體熒光定量PCR又稱，qPCR法：

支原體熒光定量PCR法（qPCR）：是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標(biāo)記，使PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物帶有熒光，利用熒光信號的變化和配套軟件，進(jìn)行DNA擴(kuò)增反應(yīng)的實(shí)時(shí)監(jiān)測，簡稱qPCR。

優(yōu)點(diǎn)：

①靈敏度高、特異性強(qiáng)。

②時(shí)間短，2-3小時(shí)出結(jié)果

③檢測結(jié)果可定量

④操作簡便

支原體qPCR檢測試劑盒特點(diǎn)

1.內(nèi)控對照為獨(dú)立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2.高特異性，一次檢測即可涵蓋所有常見易感染細(xì)胞的支原體物種（包括歐洲藥典規(guī)定的9種支原體）。與細(xì)菌和真核DNA無交叉反應(yīng)。

3.高靈敏度，最低檢測限可達(dá)到≤10CFU/ml。

4.相應(yīng)配套的支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA，便于特異性驗(yàn)證。

5.有相應(yīng)配套的支原體絕對定量標(biāo)準(zhǔn)品，便于最后定量檢測。